Miért nagyobb az olajlencse nagyítása, mint a közönséges objektívé?
Okok, amiért a baktériumokat fixálni kell a festés előtt mikrobiológiai kísérletekben:
1: Megöli a sejteket, könnyen festhető festékkel.
2: A baktériumok tapadjanak a tárgylemezhez, és nem könnyű vízzel lemosni.
Rögzítéskor lassan meg kell szárítani. Ha nagyon fel akarsz gyorsítani, akkor az alkohollámpa lángja fölött néhányszor megszáríthatod a távolban. Ne hagyja, hogy az üveglap felmelegedjen, különben elpusztíthatja a baktériumok életformáját.
Gram-festés és baktériumok mikroszkópos megfigyelése
1. Kísérleti elv
Gram-festés elve: A baktériumok sejtfaluk összetétele és szerkezete miatt eltérően reagálnak a Gram-festésre. A Gram-pozitív baktériumok sejtfala főként egy peptidoglikán által alkotott hálózati csomó. Etanollal kezelve a hálószerkezet pórusmérete a kiszáradás miatt kisebb lesz, a permeabilitás pedig csökken, így a kristályibolya-jód komplex Az anyag nem könnyen eluálódik és visszatartja a sejtben, és a kék- az elsődleges festőanyag lila színe az elszíntelenítés és az ellenfestés után is megmarad. A Gram-negatív baktériumok sejtfalának peptidoglikán rétege vékony, lipidtartalma magas, így a színtelenítő kezelés során a lipid etanollal (vagy acetonnal) feloldódik, és a sejtfal permeabilitása megnő, így hogy a kristályibolya-jód komplex Könnyebben eluálható, és ellenfestéssel történő ellenfestés után a sejtek az ellenfestés piros színével festődnek. A mikroszkóp képalkotás elve: A modern közönséges optikai mikroszkópok két lencserendszert használnak: szemlencsét és objektívlencsét a kép nagyításához, ezért gyakran összetett mikroszkópoknak is nevezik őket. A mikroszkóp optikai rendszerében az objektívlencse teljesítménye a legkritikusabb, az olajlencse nagyítása a legnagyobb, ami a mikrobiológiai kutatások szempontjából a legfontosabb. A tárgylemez és a lencse közé merítési olaj hozzáadásának fő célja a megvilágítás fényerejének és a mikroszkóp felbontásának növelése. A levegő helyett olajat használnak fényáteresztő közegként, hogy csökkentsék a fénytörést vagy a teljes visszaverődést, és tisztábbá tegyék a megfigyelt képet.
2. Kísérleti berendezések
1. Kolóniák:
Escherichia coli 24 órás tápanyag-agar ferde tenyészet,
Staphylococcus aureus kb. 24 órás tápagar ferde tenyészet, Bacillus subtilis 12-18h tápagar ferde tenyészet.
2. Oldatok vagy reagensek:
Desztillált víz, jódoldat, kristályibolya festőoldat, 95 százalékos alkohol, szafranin festőoldat, cédrusolaj. 3. Eszköz:
Mikroszkóp, tárgylemez, oltóhurok, alkohollámpa, csipesz, lencseszövet.
3. Kísérleti lépések
a:
1. Kenet
Vegyük ki a tárgylemezt, gyújtsuk meg a tárgylemezt, égessük ki a tárgylemezen lévő alkoholt és sterilizáljuk, a közepébe csepegtessünk egy kis csepp desztillált vizet, majd az oltóhurok segítségével finoman szedjünk le egy kis mennyiségű baktériumot a teszt ferde közegre. cső, A teljes folyamat során a kémcső szájának az alkohollámpa felett kell lennie, és a sebességnek gyorsnak kell lennie, hogy megakadályozza a táptalaj szennyeződését. Ezután körkörös mozdulatokkal kenje be a kis vízcseppeket az üveglapra, álljon meg, amikor a vízcseppek zavarosak, és várják meg, amíg megszáradnak és rögzítik.
2. Elsődleges festés
Cseppentsünk kristályibolyát (a baktériumfilmet célszerű csak befedni) a telepre, festjük 1-2 percig, öntsük le a festőoldatot, és öblítsük le finom vízzel a tárgylemez tetejéről, amíg az eluátum színtelenné válik, és helyezze a foltot a tárgylemezre. Rázza le a vizet a szeletekről.
3. Maró
Cseppenként adjon hozzá jódoldatot, hogy eltávolítsa a maradék vizet, fedje le körülbelül 1 percig, majd mossa le vízzel.
4. Elszíntelenítés
Rázza le a vizet a tárgylemezről, döntse meg a tárgylemezt, és adjon hozzá 95 százalékos alkoholt, hogy elszíntelenítse a fehér háttér alatt, amíg a kifolyó alkohol már nem tűnik kéknek, azonnal öblítse le az alkoholt vízzel, és helyezze rá a tárgylemezt. le a vizet a szeletekről.
5. Ellenfestés
Ellenfestés szafranin oldattal körülbelül 1-2 percig, mossa le vízzel, majd szárítsa meg nedvszívó papírral
6. Mikroszkópos vizsgálat:
Keresse meg a megfigyelni kívánt baktériumtelepet az alacsony nagyítású lencse alatt (mozgassa tovább a tárgylemezt, ha vörös árnyékot érez, azonnal álljon meg, állítsa be a nagyítást, ha nem kolónia, keresse tovább), emelje fel a lencsetartályt, majd váltson az olajtükörre. Cseppentsen egy csepp cédrusolajat a mintaterületre, és óvatosan engedje le a lencse hengerét a durva beállítóval úgy, hogy az olajlencse elmerüljön az olajban, és majdnem hozzáérjen a mintához. Emelje fel a kondenzátort a legmagasabb helyzetbe, és nyissa ki teljesen a rekeszt, a durva beállító segítségével lassan emelje fel az objektív hengerét, amíg a tárgy képe meg nem jelenik a látómezőben, majd használja a finombeállítót, hogy tisztán és fókuszban legyen.
