A különbség a lézeres konfokális mikroszkóp és a hagyományos optikai mikroszkóp között
A lézeres pásztázó konfokális fluoreszcencia mikroszkóp egy viszonylag fejlett molekuláris és sejtbiológiai elemző műszer, amely számítógépes, lézeres és képfeldolgozási technológiát használ a biológiai minták háromdimenziós adatainak beszerzésére. Elsősorban az élő sejtek szerkezetének, valamint az egyes molekulák és ionok biológiai változásainak megfigyelésére, kvantitatív elemzésre és valós idejű mennyiségi meghatározásra szolgál.
A lézeres konfokális mikroszkópia elve: használja a fényforrás mögött elhelyezett megvilágító tűlyukat és a detektor előtt elhelyezett érzékelő lyukat a pontmegvilágítás és a pontérzékelés megvalósításához. A fényforrásból a megvilágító tűlyukon keresztül kibocsátott fény a minta fókuszsíkjának egy pontjára fókuszál, és az ebből a pontból kibocsátott fluoreszcenciát a detektáló lyukon leképezik, és az ezen a ponton kívül kibocsátott fényt a detektálás blokkolja. tűlyuk. A megvilágító tűlyuk és az érzékelési tűlyuk konjugált a besugárzott ponthoz vagy a detektált ponthoz, így az észlelt pont a konfokális pont, és az a sík, ahol az észlelt pont található, a konfokális sík.
A számítógép az észlelt pontokat képpontok formájában jeleníti meg a számítógép képernyőjén. A teljes kép létrehozása érdekében az optikai úton lévő letapogató rendszer a minta fókuszsíkján pásztáz egy teljes konfokális képet. Mindaddig, amíg a színpad fel-le mozog a Z tengely mentén, a minta új rétege a konfokális síkra kerül, és a minta új rétege megjelenik a monitoron. A Z tengely folyamatos mozgatásával a minta különböző rétegeiről folyamatos képeket kaphatunk. Világos vágott kép.
A különbség a hagyományos fénymikroszkópok között
A hagyományos fluoreszcens mikroszkópoknak van egy áthidalhatatlan hiányossága: a fókuszsíkon kívüli fluoreszcens struktúrák elmosódnak és elmosódnak. Ennek az az oka, hogy a legtöbb biológiai példánynak átfedő szerkezete van. Ha a fluoreszcensen jelölt struktúrák különböző szinteken oszlanak el és átfedik egymást, akkor a fókuszsík feletti vagy alulról érkező szórt fluoreszcenciát az objektív is megkapja, és a fluoreszcens mikroszkóp felbontása jelentősen javul. csökkenteni.
A hagyományos optikai mikroszkópok alapján a lézeres pásztázó konfokális mikroszkópok lézerfényt használnak fényforrásként, alkalmazzák a konjugált fókuszálás elvét és eszközét, és számítógépeket használnak a megfigyelt objektumok digitális képfeldolgozására, megfigyelésére, elemzésére és kimenetére. A minta tomográfiás szkenneléssel és leképezhető a sejtek háromdimenziós térszerkezetének roncsolásmentes megfigyelése és elemzése céljából. Ugyanakkor ezzel a technológiával immunfluoreszcens jelöléssel és ionfluoreszcens jelölőszondákkal nemcsak a rögzített sejteket és szövetmetszeteket lehet megfigyelni, hanem az élő sejtek szerkezetének, molekuláinak, ionjainak és élettevékenységének valós idejű dinamikus megfigyelését és detektálását is elvégezheti. szubcelluláris szinten Az olyan élettani jelek megfigyelése, mint a Ca2 plusz, a pH-érték, a membránpotenciál és a sejtmorfológiai változások, a morfológia, molekuláris sejtbiológia, idegtudomány, farmakológia és genetika területén a hatékony kutatási eszközök új generációja lett.
