A többfoton lézeres pásztázó mikroszkópok erősségei és korlátai
Az előnyök a következők:
1. Vörös vagy infravörös fénnyel gerjesztett fényszórás kicsi (a kis részecskék szóródása fordítottan arányos a hullámhossz negyedik hatványával).
2. Nincs szükség tűlyukkra, több szórt fotont képes összegyűjteni a képalkotó keresztmetszetről-.
3. A tűlyukak nem tudják megkülönböztetni a defókuszált vagy fókuszterületekről kibocsátott szórt fotonokat, és a többfotonok jobb jel-/-zaj arányt mutatnak a mélyképalkotásban.
4. Az egyfotonos gerjesztéshez használt ultraibolya vagy látható fényt a minta könnyen elnyeli és gyengíti, mielőtt a nyaláb elérné a fókuszsíkot, megnehezítve a mély rétegek gerjesztését.
5. A biológiai mikroszkópos megfigyelés során az első szempont, hogy magának a szervezetnek az aktív állapotát ne sértse meg, valamint fenntartsa a víz, az ionkoncentráció, az oxigén és a tápanyagok keringését. A fénymegfigyelés területén mind a hő-, mind a fotonenergiának a besugárzási dózison belül kell maradnia, illetve a sejteket nem károsító fényenergiának.
6. A többfoton mikroszkópiának is számos előnye van. A három-dimenziós felbontás, a mélységi invázió, a szórási hatékonyság, a háttérfény, a jel-/-zaj arány, a szabályozás stb. tekintetében a lézermikroszkópok olyan páratlan vagy kiváló tulajdonságokkal rendelkeznek, amelyekkel a korábbi lézermikroszkópok nem rendelkeztek.
A többfoton konfokális lézeres pásztázó mikroszkópot különféle kutatási és alkalmazási területekre kiterjesztették. Három-nem-roncsolásos megfigyelést tud végezni természetes állapotukban lévő mintákon, és javítja a rendszer felbontását és jel-/-zaj arányát. A többfotonos gerjesztés utáni anyagtulajdonság-változások felhasználásával}, három{4}dimenziós magassági adatok tárolása tetszőleges irányú háromdimenziós mikrogyártás is megvalósítható, aminek nagy az alkalmazási értéke. Feltételezhető, hogy a többfoton konfokális mikroszkópiához kapcsolódó mechanikai, anyag- és lézeres technológiák továbbfejlesztésével a többfoton konfokális lézeres pásztázó mikroszkópia egyre nagyobb fejlődést és szélesebb körű alkalmazásokat fog elérni
A hátrányok a következők:
1. Csak fluoreszcens képalkotáshoz.
2. Ha a minta olyan kromoforokat tartalmaz, amelyek elnyelik a gerjesztő fényt, például pigmenteket, a minta hőkárosodásnak lehet kitéve.
3. A felbontás enyhén csökkent, bár konfokális kis lyukak egyidejű kihasználásával javítható, jelveszteség lép fel.
4. A drága ultragyors lézerek korlátai miatt a többfotonos pásztázó mikroszkópok költsége viszonylag magas.
