A fluoreszcens mikroszkópia alapelvei és szerkezeti jellemzői
A fluoreszcens mikroszkóp a pontszerű fényforrás nagy fényhatékonyságának felhasználása, a színszűrő rendszeren keresztül bizonyos hullámhosszú fény (például ultraibolya 3650 vagy lila-kék 4200) kibocsátása gerjesztő fényként, fluoreszkáló anyag gerjesztéseként. a minta különböző színű fluoreszcenciát bocsát ki, majd az objektíven és az okulárokon keresztül felnagyítja a megfigyeléshez. Ily módon az erős kontrasztos háttérben, még ha a fluoreszcencia nagyon gyenge is, könnyen azonosítható, nagy érzékenység, elsősorban a sejtszerkezet és -funkció, valamint a kémiai összetétel vizsgálatára használják. A fluoreszcens mikroszkóp alapszerkezete egy közönséges optikai mikroszkópból és néhány kiegészítőből áll (például fluoreszcens fényforrás, gerjesztő szűrők, kétszínű nyalábleválasztó és blokkoló szűrők stb.). Fluoreszcens fényforrás – általában használt ultranagynyomású higanylámpa (50-200W), amely többféle hullámhosszú fényt bocsát ki, de mindegyik fluoreszcens anyagnak a legerősebb a fluoreszcens gerjesztési hullámhossza, ezért szükség van gerjesztőszűrők hozzáadására (általában ultraibolya, ibolya, kék és zöld gerjesztő szűrő), így csak egy bizonyos hullámhosszú gerjesztő fény a minták besugárzásán keresztül, míg a másik fény elnyelődik. Szükséges tehát egy gerjesztő szűrő (általában ultraibolya, ibolya, kék és zöld gerjesztő szűrők) hozzáadása, hogy csak egy bizonyos hullámhosszú gerjesztőfény menjen át a próbatesten, míg a többi fény elnyelődik. Ha minden anyagot gerjesztő fénnyel sugározunk be, akkor nagyon rövid időn belül hosszabb hullámhosszú látható fluoreszcenciát bocsát ki, mint a besugárzott fény. A fluoreszcenciának van egy specifitása, általában gyengébb, mint a gerjesztő fény, hogy képes legyen megfigyelni a specifikus fluoreszcenciát az objektív lencséjében, ami mögött blokkoló (vagy elnyomó) szűrő hozzáadása szükséges.
Szerepe kettős:
Az egyik az, hogy elnyeli és blokkolja a gerjesztő fényt a szemlencsébe, hogy ne zavarja a fluoreszcenciát és a szemkárosodást.
A második a specifikus fluoreszcencia kiválasztása és átengedése, egy meghatározott fluoreszcens színt mutatva. A kétféle szűrőt együtt kell kiválasztani és használni.
