Biológiai minták előkészítése és megfigyelése elektronmikroszkópiához
A mikroszkóp felbontása a használt fény hullámhosszától függ. Az 1933-ban megjelent elektronmikroszkóp a látható fényénél jóval rövidebb hullámhosszú elektronsugarat használ fényforrásként, így az általa elérhető felbontás jelentősen javul az optikai mikroszkópéhoz képest. A fényforrások különbsége egy sor különbséget is meghatároz az elektronmikroszkópok és az optikai mikroszkópok között.
Az elektronsugaras leképezés elvi különbségei és a mintákon való eltérő hatásmódok szerint a modern elektronmikroszkópok sokféle típusra fejlődtek. Jelenleg a leggyakrabban használt transzmissziós elektronmikroszkópok és pásztázó elektronmikroszkópok. Az előbbi teljes nagyítása 1000-1000000 között lehet. Az utóbbi teljes nagyítása 20 és 300,000-szeres között változhat. Ez a kísérlet elsősorban kétféle mikroszkóp minta, transzmissziós elektronmikroszkóp és pásztázó elektronmikroszkóp elkészítését mutatja be.
2. Berendezés
1. Baktériumok Escherichia coli (Escherichia coli) ferde.
2. Oldat vagy reagens amil-acetát, tömény kénsav, abszolút etanol, steril víz, 2%-os nátrium-foszfotvolframát (pH 6.5-8.0) vizes oldat, 0.3% polietilén formaldehid (kloroformban oldódó) oldat, sejtek C pigment, ammónium-acetát, pBR322 plazmid.
3. Műszerek vagy egyéb eszközök: közönséges optikai mikroszkóp, rézháló, porcelántölcsér, főzőpohár, edény, steril csepegtető, steril csipeszek, tűk, tárgylemezek, számlálótábla, vákuumbevonó gép, kritikus pont szárító stb.
3. A művelet lépései
(1) Mintaelőkészítés és megfigyelés transzmissziós elektronmikroszkópiához
1. Fémháló kezelése
Az optikai mikroszkópos mintát egy tárgylemezre helyezzük megfigyelés céljából. A transzmissziós elektronmikroszkópiában azonban, mivel az elektronok nem tudnak áthatolni az üveglapon, a hálós anyagok csak hordozóként használhatók, ezeket általában hordozóhálóknak nevezik. A hordozóháló a különböző anyagok és formák miatt sok különböző specifikációra osztható, amelyek közül a leggyakrabban használt 200-400 háló (lyukak száma) rézháló. A rézhálót használat előtt kezelni kell, hogy eltávolítsa a szennyeződéseket és tisztán tartsa, különben befolyásolja a tartófólia minőségét és a mintafotók tisztaságát. Ebben a kísérletben egy 400-hálós rézhálót használnak, amely a következőképpen kezelhető: először áztassa be és fehérítse amil-acetáttal több órán keresztül, majd öblítse le többször desztillált vízzel, majd áztassa be abszolút etanolba. kiszáradás. Ha a rézháló a fenti eljárások után sem tiszta, áztassa 1-2 percig híg tömény kénsavba (1:1), vagy forralja néhány percig 1%-os NaOH-oldatban, majd öblítse le desztillált. többször vízzel, majd vízmentesbe tesszük. Dehidratáljuk etanolban, és félretesszük.
2. Tartó membrán előkészítése
A minták megfigyelésekor a hordozóhálót strukturálatlan, egyenletes fóliával is le kell vonni, különben a hordozóháló lyukaiból kis minták szivárognak ki. Ezt a fóliát általában hordozófóliának vagy hordozófóliának nevezik. A hordozófóliának elektronátlátszónak kell lennie, és vastagságának általában 20 nm-nél kisebbnek kell lennie; az elektronsugár hatása alatt a filmnek bizonyos mechanikai szilárdsággal kell rendelkeznie, hogy fenntartsa a szerkezeti stabilitást és jó hővezető képességgel rendelkezzen; ezen túlmenően a támasztóhálózatot kell használni az elektronmikroszkópiában. Nem lehet alatta látható szerkezet, nem lehet kémiai reakció a szállított mintával, és nem zavarhatja a minta megfigyelését. Vastagsága általában körülbelül 15 nm. A hordozófólia lehet műanyag fólia (például kollódiumfólia, polietilén-formaldehid fólia stb.), szénfólia vagy fémfólia (például berillium fólia stb.). Normál munkakörülmények között a műanyag fólia megfelel a követelményeknek. A műanyag fóliák közül a kollódiumfólia viszonylag könnyen elkészíthető, de szilárdsága nem olyan jó, mint a polietilén-formaldehid fólia.
