A szövetblokk térfogatának mérése biológiai mikroszkópokkal
Eddig a kriofixálás, a fagyasztott ultra-vékony metszetek és a fagyasztva-szárítás a szövet- és sejtröntgenmikroszkópos-rutin módszere. Kérjük, adja meg a következő adatokat ezzel a módszerrel kapcsolatban:
A reflektorral ellátott biológiai mikroszkóp a reflektort fel-le mozgatva mérsékelt fényerőt érhet el, és a változtatható rekesznyílás rekeszértéke is módosítható a közepes fényerő eléréséhez. Ha a fény a napból származik, akkor a reflektort megfelelően meg lehet emelni, és a változtatható fény rekesznyílása megfelelően nagyítható. Ha túl erős a fény, a reflektort megfelelően le lehet engedni, és megfelelően csökkenteni lehet a kereszteződés apertúráját. Ha ebben a helyzetben továbbra is káprázatosnak érzi magát, dönthet úgy, hogy megfelelő szűrőt helyez el a reflektorfény alatti konzolra. Ez a tölgy olyan fényességet érhet el, amely kielégíti Önt. Természetesen a reflektor felső és alsó helyzetének beállításával módosítható a leolvasott fény rekesznyílása és kiválasztható a megfelelő szűrő, ami bizonyos gyakorlást és tapasztalatot igényel.
A biológiai mikroszkópia egyik nagyon fontos kérdése a mintavételezés és a sejtek izolálásának folyamata. A fagyasztva-szárítás és a gyantabeágyazás (FD) után a fagyasztott ultra-vékony metszeteket gondosan fel kell dolgozni, hogy az egyes részek 65 elemes tartalma ne sérüljön meg a megfigyelés és az elemzés során. A röntgen-mikroanalízis számos lépése és magas költsége miatt sajnálatos, hogy helytelen következtetéseket vonunk le, ha az elemzett sejtek hosszan tartó és többlépcsős feldolgozás után sérültek vagy elhaltak. A zselatináz kezeléssel elválasztott szívizomsejteknek két formája van: az egyik hosszú rúd, a másik kör alakú. Ez utóbbi elhaló sejtekre vonatkozik, amelyek a sejtszétválás során károsodnak.
Az elektrolitok tartalma és eloszlása ebben a két sejttípusban biológiai mikroszkóp alatt nagyon eltérő. A körkörös szívizomsejtekben nagyon magas a Na és rendkívül alacsony a K, a lineáris dendritekben pedig nagyon magas a Ca koncentrációja. Más analitikai módszerekkel végzett ellenőrzések után bebizonyosodott, hogy a cirkuláris sejtekben a magas Na és alacsony K, valamint a mitokondriumokban a magas Ca a sejtszétválás során fellépő membránkárosodás következménye. A sejtek és szövetek hidegrögzítési módszere gyakran először kioltást, majd folyékony nitrogénben való tárolást foglal magában. A kioltó rögzítés kulcsfontosságú a tartósító hatás szempontjából. Az élő sejtek vagy a friss szövetek vízben gazdagok, és amikor kioltják, a sejtek vagy szövetek azon részei, amelyek közvetlenül érintkeznek a hűtőközeggel (különösen, ha folyékony nitrogént használnak a hűtéshez), gyakran először lefagynak és rögzítenek, és "héjat" képeznek, amely megakadályozza a sejtek központi részének összetörését és rögzítését. Ezért a röntgen-mikroanalízis során gyakran kiderül, hogy jégkristályok vannak a nagyobb sejtek központi részében. Ennek elkerülése érdekében hűtőközegként olyan anyagot használnak, amelynek olvadáspontja magasabb, mint a folyékony nitrogén, de 806 c-kal alacsonyabb. Sok ilyen anyag létezik, de könnyen beszerezhetők, és a legkedvezőbb árú a koncentrált propán (forráspont: 42,120 c, olvadáspont: 187,10 c, molekulatömeg: 44,1), amely szintén gyors hűtési sebességgel rendelkezik. De hátránya, hogy gyúlékony.
