Hogyan válasszuk ki a megfelelő fluoreszcens mikroszkópot
A fluoreszcens mikroszkóp egy szabványos mikroszkópos képalkotó berendezés a laboratóriumokban és a patológiai osztályokon, amely fluoreszcencia jellemzőket használ megfigyelésre és képalkotásra. Széles körben alkalmazzák különböző területeken, mint például sejtbiológia, neurobiológia, botanika, mikrobiológia, patológia, genetika stb. A fluoreszcens képalkotás előnyei a nagy érzékenység és specificitás, így kiválóan alkalmas specifikus fehérjék, organellumok stb. eloszlásának megfigyelésére. szövetekben és sejtekben, a társ lokalizáció és kölcsönhatások tanulmányozása, az élet dinamikus folyamatainak, például az ionkoncentráció változásainak követése, stb.
Mikroszkópok kiválasztása
A fluoreszcens mikroszkópok alapvetően három kategóriába sorolhatók: függőleges fluoreszcens mikroszkópok (szeletelésre alkalmasak), fordított fluoreszcens mikroszkópok (élő sejtekre és szeletelésre is alkalmasak) és sztereo fluoreszcens mikroszkópok (nagyobb mintákra, például növényekre, zebradánokra (felnőtt/felnőtt). embrionális), medaka, egér/patkány szervek stb.).
Fluoreszcens szűrőblokkok kiválasztása
A szűrőblokkok kiválasztásánál nem csak a fluoreszcens szondák gerjesztési és emissziós hullámhosszát kell figyelembe venni, hanem azt is, hogy van-e nem specifikus gerjesztés, és van-e színáthallás a több színnel jelölt mintáknál. A kísérletben a gerjesztéshez a lehető legközelebbi hullámhosszt választjuk a gerjesztési csúcshoz, és a vételi tartománynak tartalmaznia kell a csúcskibocsátást. Az Alexa Fluor 488 gerjesztési csúcsa 500 nm, fluoreszcens mikroszkópban 480/40 gerjesztési szűrő választható. A fluoreszcens mikroszkópiában általánosan használt fluoreszcens szűrőblokkok két típusra oszthatók: long pass (LP) és sáváteresztő (BP), amelyeket szintén az igények szerint kell kiválasztani.
Konfokális mikroszkóp
A hagyományos fluoreszcens mikroszkópos megfigyelések során a fluoreszcensen jelölt anyagok és a spontán fluoreszcens struktúrák átfedése miatt ezek szorosan össze vannak kötve. A hagyományos esőfluoreszcens mikroszkópos objektívek azonban nemcsak a fókuszsíkból gyűjtik a fényt, hanem a fókuszsíkban fel-le szórják a fényt, ami jelentősen csökkenti a képfelbontást és a kontrasztot.
A konfokális képalkotás csak az önfókuszáló síkról visszaverődő fényt érzékeli, így megoldja a fenti problémát. A fényforrás egy tűlyukon keresztül kis és finom foltot képez a fókuszsíkon, a fókuszsíkból kibocsátott fényt pedig az objektíven keresztül gyűjtik össze. Az objektívlencse fókuszsíkja feletti vagy alatti pontokból kibocsátott fluoreszcencia nagy része nem tud konvergálni a tűlyukhoz. Csak a fókuszsíkban található fluoreszcencia és a defókuszált fluoreszcencia egy kis része tud áthaladni a tűlyukon, míg a fókuszsíkon kívüli fénysugár a lyuklemez elé vagy mögé konvergál, és megakadályozza, hogy a tűlyukon keresztül bejusson a detektorba. Az észlelt kép a fókuszsíkból származik, így a végső képminőség jelentősen javul.
A lézeres pásztázó konfokális mikroszkópia különféle előnyei és praktikussága miatt jelenleg nélkülözhetetlen kísérleti asszisztens a nagy pontosságú sejtbiológia, botanika és sejtkutatás területén. Ugyanakkor a jövőbeni tudományos kutatóközpontokban ez lesz a legalapvetőbb és legfontosabb kutatási eszköz.
