A lézeres pásztázó multifoton mikroszkóp előnyeinek fokozása
A lézeres pásztázó multifoton mikroszkópia jelentős előrelépés az optikai mikroszkóppal szemben. Meg tudja figyelni az élő sejtek mélyszerkezetét, a rögzített sejtek és szövetek szerkezetét, valamint tiszta és éles többrétegű Z-síkú struktúrákat, azaz optikai metszeteket tud készíteni, amelyekből megszerkesztheti A próbatest háromdimenziós szilárd szerkezetét. A konfokális mikroszkópiánál lézeres fényforrást használnak, amely kitágítás után kitölti az objektívlencse teljes hátsó fókuszsíkját, majd áthalad a tárgylencse lencserendszerén, hogy a minta fókuszsíkján egy nagyon kis pontba konvergáljon. Az objektívlencse numerikus rekeszértékétől függően a legfényesebb megvilágítási pont átmérője körülbelül 0,25 ~ 0,8 μm, a mélysége pedig körülbelül 0,5 ~ 1,5 μm . A konfokális folt mérete a mikroszkóp kialakításától, a lézer hullámhosszától, az objektívlencse jellemzőitől, a szkennelési egység állapotának beállításaitól és a minta tulajdonságaitól függ. A terepi mikroszkópiának nagy megvilágítási tartománya és mélysége van, míg a konfokális mikroszkópiának fókuszált megvilágítása van, amely a fókuszsíkon lévő fókuszpontra fókuszál. A konfokális mikroszkópia legalapvetőbb előnye, hogy vastag fluoreszcens mintákon finom optikai metszeteket tud végezni (amely elérheti az 50 μm-t vagy azt is), a metszetek vastagsága pedig körülbelül 0,5-1,5 μm. Optikai metszetképek sorozata készíthető a minta fel-le mozgatásával a mikroszkóp Z-tengelyű léptetőmotorjával. A képinformáció megszerzését a síkon belül szabályozzák, és nem zavarják a minta más helyeiről kibocsátott jelek. A háttérfluoreszcencia hatásának megszüntetése és a jel-zaj arány növelése után a konfokális képek kontrasztja és felbontása jelentősen javul a hagyományos térben megvilágított fluoreszcencia képekhez képest. Sok példányban sok bonyolult szerkezeti komponens fonódik össze, és összetett rendszereket alkot, de miután elegendő optikai metszetet sikerült összegyűjteni, szoftver segítségével három dimenzióban rekonstruálhatjuk. Ezt a kísérleti módszert széles körben alkalmazzák a biológiai kutatásokban a sejtek vagy szövetek közötti összetett szerkezeti és funkcionális kapcsolatok tisztázására.
