Közvetlen számlálás mikroszkóppal mikrobák számára
Kísérleti elv
A mikroszkóp alatt végzett közvetlen számlálás hemocitométerrel egy általánosan használt mikrobiális számlálási módszer. Ennek a módszernek az az előnye, hogy intuitív és gyors. Helyezze a megfelelően hígított baktériumszuszpenziót (vagy spóraszuszpenziót) a számlálókamrába a tárgylemez és a hemocitométer fedőüvege közé, és mikroszkóp alatt számoljon. Mivel a számlálókamra térfogata rögzített (0,1 mm2), átszámítható az egységnyi térfogatra jutó mikroorganizmusok teljes számává a mikroszkóp alatt megfigyelt mikroorganizmusok számának megfelelően. Mivel ez a módszer az élő és elpusztult baktériumok összegét számolja meg, teljes baktériumszámlálási módszernek is nevezik.
A hemocitométer általában egy speciális üveglemez, amelyen négy horony három platformot alkot. A középső emelvényt egy rövid vízszintes horony két részre osztja. A platform mindkét oldalán egy rács van gravírozva. Minden rács kilenc nagy négyzetre van osztva. A középső nagy négyzet a számláló szoba. A mikroorganizmusokat a számlálókamrában számolják meg. A vérsejtszámláló tábla felépítése a Ⅷ-1 ábrán látható.
A számlálószoba léptékének általában két specifikációja van, az egyik az, hogy egy nagy négyzet 16 középső négyzetre, és minden középső négyzet 25 kis négyzetre van osztva (Ⅷ-2 ábra); a másik egy nagy négyzet. A négyzet 25 középső négyzetre, és minden középső négyzet 16 kis négyzetre van osztva (Ⅷ-1, C ábra). De nem számít, milyen számlálótábláról van szó, a kis négyzetek száma minden nagy négyzetben ugyanannyi, azaz 16×25=400 kis négyzet, amint az a Ⅷ-2 ábrán látható.
Minden nagy négyzet oldalhossza 1 mm, a nagy négyzetek területe 1 mm2. A fedőüveg letakarása után a csúszóüveg és a fedőüveg közötti magasság 0,1 mm, így a számlálókamra térfogata 0,1 mm3.
Számláláskor általában számolja meg a baktériumok teljes számát az öt középső négyzetben, majd kapja meg minden középső négyzet átlagos értékét, majd szorozza meg 16-tal vagy 25-tel, hogy megkapja a baktériumok teljes számát egy nagy négyzetben, majd konvertálja a a baktériumok teljes száma 1 ml baktériumoldatban.
Laboratóriumi felszerelés
Hemocitométer, mikroszkóp, fedőlemez, steril kapilláris;
Kísérleti anyagok
Saccharomyces cerevisiae szuszpenzió
Kísérleti eljárás (mikrobiális mikroszkópos közvetlen számlálási módszer)
1. hígítás
A Saccharomyces cerevisiae szuszpenziót megfelelően hígítsa fel. Ha a baktériumoldat nem sűrű, nem kell hígítani.
2. Mikroszkópos számláló szoba
A minták hozzáadása előtt végezze el a számlálólemez számlálókamrájának mikroszkópos vizsgálatát. Ha szennyeződés van, számolás előtt meg kell tisztítani.
3. minta hozzáadása
Fedje le a tiszta és száraz hemocitométer lemezt fedőüveggel, majd steril, finom szájú cseppentővel csepegtessen egy kis cseppet a hígított Saccharomyces cerevisiae oldatból a fedőüveg széléről (nem túl sokat), hogy a baktériumoldat közel van a rés mentén a réshez. A kapilláris ozmózis magától bejut a számlálókamrába, és az általános számlálókamra megtölthető bakteriális folyadékkal. Ügyeljen arra, hogy ne legyenek légbuborékok.
4. mikroszkóp számlálás
5 perces pihentetés után helyezze a hemocitométert a mikroszkóp tárgyasztalára, először kis teljesítményű lencsével keresse meg a számlálókamra helyét, majd váltson nagy teljesítményű lencsére a számláláshoz. Ha a számlálás előtt úgy találják, hogy a baktériumoldat túl vastag vagy túl híg, a hígítást a számlálás előtt újra be kell állítani. Általában a mintahígításhoz körülbelül 5-10 baktérium szükséges minden sejtben. Minden számlálókamra 5 középső rácsban (opcionális 4 sarok és központi rács) választja ki a baktériumokat a számláláshoz. A rácsvonalon lévő baktériumokat általában csak a felső és a jobb sorban számolják. Élesztőgombásodás esetén, amikor a bimbótest mérete eléri az anyasejt felét, számoljunk meg két baktériumot. Számoljon meg egy mintát, hogy a minta baktériumtartalmát a két számlálókamrában mért értékekből számítsa ki.
5. A hemocitométer tisztítása
Használat után öblítse le a csapon lévő vérsejtszámláló lemezt vízsugarakkal, ne mossa le kemény tárggyal, és mosás után szárítsa meg egyedül vagy hajszárítóval. Mikroszkópos vizsgálat, figyelje meg, hogy vannak-e maradék baktériumok vagy egyéb üledékek az egyes sejtekben. Ha nem tiszta, többször meg kell mosni, amíg tiszta nem lesz.
