Különbség a fluoreszcens mikroszkóp és a hagyományos optikai mikroszkóp között
A fluoreszcencia mikroszkóp és a közönséges optikai mikroszkóp különbsége, a fluoreszcencia mikroszkóp és a közönséges optikai mikroszkóp különbözik, nem a szokásos fényforrás megvilágításán keresztül figyelhető meg a minta, hanem egy bizonyos hullámhosszú fény (általában ultraibolya, kék-ibolya) használata. a minta gerjesztése a mikroszkóp alatt a fluoreszcens anyagon belül úgy, hogy az fluoreszcens fényt bocsát ki, így a fluoreszcens mikroszkóp szerepe a fényforrásban nem közvetlen megvilágítás, hanem a minták egyfajta stimulálása a belső A fény fluoreszcenciájára. A fluoreszcens mikroszkóp forrása nem közvetlen megvilágítás, hanem energiaforrás a mintában lévő fluoreszcens anyag stimulálására. A próbatest megfigyelésének oka nem a fényforrás megvilágítása, hanem az a fluoreszcens jelenség, amelyet a gerjesztett fényenergia elnyelése után a próbatestben lévő fluoreszcens anyag mutat. Látható, hogy a fluoreszcens mikroszkóp jellemzői elsősorban abban rejlenek, hogy fényforrása nagyszámú, specifikus hullámhossz-tartományú gerjesztőfényt képes ellátni, így a vizsgált mintán belüli fluoreszcens anyagok a szükséges intenzitású gerjesztő fényt képesek elérni. Ugyanakkor a fluoreszcens mikroszkópnak megfelelő szűrőrendszerrel kell rendelkeznie. A fluoreszcens mikroszkóp a **fluoreszcens hisztokémia alapvető eszköze. Ultra-nagy nyomású fényforrásból, szűrőrendszerből (beleértve a gerjesztő és elnyomó szűrőlemezt), optikai rendszerből és fényképészeti rendszerből, valamint más fontosabb alkatrészekből áll, és egy bizonyos hullámhosszú fényt használ a minta fluoreszcencia kibocsátására.
1. A fluoreszcens gerjesztés módja: a hullámhossz-tartomány szerint a fényt UV gerjesztési módszerre (ultibolya megvilágítással) és BV gerjesztési módszerre (kék ibolya fénnyel) osztják fel, kétféle UV-gerjesztési módszer rövidebb, mint 400 nm ultraibolya fény közelében gerjesztés. Ennél a módszernél nincs látható gerjesztő fény, így a megfigyelt fluoreszcencia a festék inherens fluoreszcenciáját mutatja, és könnyen megkülönböztethető a mintán lévő fajlagos fluoreszcencia a háttérszövet önfluoreszcenciájától.
2. BV gerjesztési módszer: A módszer középpontja 404 nm, 434 nm ultraibolya fénytől kék fényig a gerjesztéshez. Ez a módszer kék fényt használ a minta besugárzására, ezért a fluoreszcencia-megfigyelő rendszer cut-off szűrőjének olyan szűrőt kell használnia, amely teljesen blokkolja a kék fényt, és teljes mértékben átengedi a kívánt zöld és sárga fluoreszcenciát. Fluoreszcens pigmentek a fluoreszcens antitest módszerhez. Mivel a gerjesztő fény maximális abszorpciójának hullámhossza és a fluoreszcencia maximális emissziójának hullámhossza közel van egymáshoz, ezért a BV gerjesztési módszerben használt szűrőknek éles vágási szűrőknek kell lenniük. Ez a módszer gerjesztő fényként kék fényt használ, így a fluorokróm abszorpciós hatásfoka nagyobb és világosabb képet kaphatunk. Hátránya, hogy 500 nm alatt nem látszik a fluoreszcencia, 500 nm felett pedig az egész kép sárgának tűnik. A fluoreszcens antitest módszerben a specifitás nagy részét a fluorokróm egyedi színe alapján ítélik meg, így a fent leírt BV gerjesztési módszer hátrányai általában rendkívül befolyásolják a finom specificitást.
