Ismertesse részletesen a fluoreszcens szondák kiválasztásának lépéseit és módszereit a konfokális mikroszkópiához!
A konfokális mikroszkóppal végzett kísérletek során bizonyos kísérleti indikátorok kimutathatók magának a mintának vagy az exogén anyagoknak az autofluoreszcenciájával, de a legtöbb vizsgálandó anyag nem rendelkezik mérhető fluoreszcenciával, ezért fluoreszcens szondákkal kell jelölni őket. Mérhető fluoreszcens jellel rendelkezik. Tehát hogyan válasszunk fluoreszcens szondákat konfokális mikroszkópiához?
1. Határozza meg a vizsgálandó indikátorokat a kísérlet céljának megfelelően!
A kimutatási index meghatározása után a fluoreszcens próbák szelekciós tartományát is meghatározzuk. Látható, hogy a kísérletben használt fluoreszcens szonda kiválasztását a kísérlet célja határozza meg. Például, ha a kísérlet célja a szívizomsejtekben a kalciumionok változásának vizsgálata pitvarfibrilláció esetén, akkor megállapítható, hogy a vizsgálandó anyag a szívizomsejtekben lévő kalciumion, és a fluoreszcens szondák kiválasztási tartománya a következőre korlátozódik: kalciumion-próbák, amelyek képesek megjelölni az élő sejteket. Tű.
2. Határozza meg a rendelkezésre álló fluoreszcens szondák tartományát
Új kísérleti anyagok vagy indikátorok esetében, ha a kísérlet célja nem új fluoreszcens szondák feltárása, választhatja az érett próbák és jelölési módszerek alkalmazását. A vizsgálandó anyag címkézésére alkalmas fluoreszcens szondák típusa vagy köre meghatározható a hiteles szakirodalomban vagy a jól ismert reagensgyártók termékkatalógusaiban itthon és külföldön.
3. Vizsgálja meg, hogy a fluoreszcens szonda jellemzői megfelelnek-e a fluoreszcens minták elkészítésére vonatkozó követelményeknek
A fluoreszcens szondák jellemzői közvetlenül befolyásolják a minták jelölését és a kísérleti eredményeket. Ezért a fluoreszcens próbák kiválasztása és a minták kísérletben történő jelölése előtt teljes mértékben meg kell érteni azok fluoreszcens jellemzőit. A vizsgálandó fluoreszcens szondák jellemzői a következők:
1. Fényszondák és minták reakciójellemzői
2. Fluoreszcens próbák érzékenysége és fluoreszcencia intenzitása
3. Fluoreszcens szondákkal jelölt minták spektrális tulajdonságai
4. A fluoreszcencia stabilitása
5. Kölcsönhatás a mintában lévő többszörös fluoreszcencia között
