Mikroszkópos képalkotó osztályterem 丨 Széles látószögű fluoreszcens mikroszkóp
Élő sejtes képalkotó alkalmazásokban a széleslátómezős fluoreszcens mikroszkópia megkönnyíti a mikroszkóp színpadán elhelyezett speciális környezeti kamrákban növesztett tapadó sejtek dinamikájának megfigyelését. A legalapvetőbb konfigurációban az EPI fluoreszcens megvilágítással felszerelt szabványos fordított szövettenyészet-mikroszkóp területi detektorrendszerrel (általában CCD-kamera), megfelelő fluoreszcens szűrőkkel és redőnyrendszerrel van összekapcsolva, amely korlátozza a sejtek túlzott kitettségét a káros gerjesztő fénynek. . Az alapvető fluoreszcens mikroszkópia gondosan összeállított interferenciaszűrőkre támaszkodik a megvilágításhoz és a kibocsátott fény detektálásához szükséges sávszélességek kiválasztásához. A fényforrások közé tartoznak a higany-, xenon- és fémhalogén ívlámpák, a sugártágító lézerrendszerek és a fénykibocsátó diódák (LED), amelyek mindegyike eltérő szűrőspecifikációt igényel. A fluoreszcens mikroszkópiában használt szintetikus fluoroforok emissziós spektruma a közeli ultraibolya, látható és közeli infravörös tartományt lefedi. A genetikailag kódolt fluoreszcens fehérjék használata nagymértékben kibővítette a fluoreszcens mikroszkópia lehetőségeit az élősejtek képalkotásában, lehetővé téve a kutatók számára, hogy pontosan megcélozzák az érdeklődésre számot tartó szubcelluláris régiókat.
A Nuohai LS 18, a Nuohai által önállóan kifejlesztett új típusú fénylapos megvilágító mikroszkóp kifejezetten átlátszó nagy szövetminták nagy felbontású 3D képalkotására készült, és különféle ép szövetek, például agy, lép, vékonybél feltárására szolgál. , vese, tüdő, szív és daganat. A szervek 3D pontos szerkezete.
Széles látómezős fluoreszcenciában a mikroszkóp objektív által gyűjtött teljes apertúrájú emisszió maximalizálja a rögzített jelet, miközben minimalizálja a szükséges expozíciós időt. Így a minták nagyon rövid fényperiódusokkal is leképezhetők. A széles látómezős képalkotás fő hátránya, hogy a fókuszsíktól távol eső területekről érkező fluoreszcencia, valamint a háttérjel nem kívánt fény, amely gyakran eltakarja az érdeklődésre számot tartó jellemzőket. Ezért a széleslátómezős képalkotás akkor hozza a legjobb eredményt, ha az érdeklődésre számot tartó jellemzők nagyok (például organellumok) vagy erősen pontozottak. Az élő sejtminták széles skálája, beleértve a tapadó sejteket, baktériumokat, élesztőket és nagyon vékony szövetmetszeteket, ideális jelöltek a széleslátószögű fluoreszcens képalkotáshoz, azonban a vastagabb (5 mikron feletti) szövetek a legmegfelelőbbek fejlettebb módszerekkel történő képalkotással.
Bár a szintetikus fluoreszcens festékekkel, kvantumpontokkal és fluoreszcens fehérjékkel végzett fluoreszcens képalkotás terén számos előrelépés történt, bizonyos esetekben hasznos a fluoreszcenciát más képalkotó módszerekkel kombinálni. Példaként a DIC használható széles látómezős fluoreszcenciával együtt a sejtek életképességének és általános morfológiájának nyomon követésére, miközben a specifikus jelölt célpontok szempontjából érdekes jelenségeket tanulmányozunk. A DIC és a fluoreszcencia egyetlen képen való megszerzése általában nem praktikus, de egy megfelelően konfigurált mikroszkópban a két technika egymás után is használható. Így az epifluoreszcens módban történő leképezés után DIC-képek nyerhetők fluoreszcensen jelölt mintákból áteresztő fény segítségével. A két kép az utóelemzés során összevonható. A DIC és a fluoreszcencia képek egyidejű gyűjtése lehetséges fejlett széles látómezős mikroszkóp konfigurációkban spektrálisan elkülönített megvilágítás (például látható és közeli infravörös) és kétkamerás vagy osztott nézetű kameraadapterek használatával. A legtöbb lézeres pásztázó konfokális mikroszkópban a képek egyidejűleg fluoreszcens és DIC módban is készíthetők, így nincs szükség az utólagos feldolgozásra. A fáziskontraszt és a Hoffman-modulációs kontraszt a széleslátóterű fluoreszcens mikroszkóppal együtt is használható. Azonban ezeknél a technikáknál az objektívlencse különleges, legyen szó fázisgyűrűről vagy Hoffman modulációs lemezről, 5-15 százalékos emissziós intenzitáscsökkenést okoz.
Cikk hivatkozása: Instrument Equipment Network https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
