Milyen előnyei vannak a konfokális lézermikroszkópiának?
A hagyományos széles látószögű mikroszkópokkal összehasonlítva a lézeres pásztázó konfokális mikroszkóp a nagy felbontással, nagy felbontással és nagy érzékenységgel rendelkezik. Széles körben használják a biomedicina területén, és fontos képalkotó eszközzé vált ezen a területen. Miért kaphat ennyi szeretetet a confocal, és milyen előnyei vannak? Ez a cikk három szempontot sorol fel a konfokális előnyök megvitatásához.
Csak a fókuszsíkon gyűjtse a jelet, így a kép tisztává válik az elmosódástól
Tehát hogyan éri el a konfokális mikroszkóp ezt az előnyt? Ez a kulcsfontosságú konfokális hardvernek köszönhető – a tűlyuknak, amint az a 2. ábrán látható. Ez egy kis lyuk a detektor előtt, és a minta fókuszsíkjával konjugált optikai síkon helyezkedik el. Amikor a gerjesztő fény besugározza a mintát, a mintaterület fókuszsíkja és nem fókuszsíkja is gerjesztve lesz fluoreszcencia jelek generálására, és beállítja a megfelelő tűlyukméretet (általában 1 Au), hogy a fluoreszcencia jel a fókuszsíkon legyen. (zöld pontozott vonal) lehetnek Fluoreszcens jelek (piros és kék szaggatott vonalak), amelyek a tűlyukon áthaladva elérik a fókuszsíkon kívüli detektort, nem érhetik el az érzékelőt a tűlyukon keresztül. A hardveres tűlyukak hozzáadásával a konfokális tiszta és kiváló minőségű képeket készíthet anélkül, hogy megváltoztatná a hagyományos fluoreszcens mikroszkópok készítési módját.
A tűlyuk megléte miatt csak a fókuszsíkon tudjuk megszerezni a jelet és nagy felbontású kétdimenziós képet kapunk. A Z tengely pozíciójának folyamatos beállításával kétdimenziós képek nyerhetők különböző Z tengely pozíciókban, és folyamatos "optikai szelet" képsorozatot kaphatunk. Ezen optikai szeletek beszerzése után a műszerszoftverrel felszerelt 3D modullal rekonstruálható a 3D kép tiszta 3D kép létrehozásához. Az optikai szeletképek roncsolásmentes, folyamatos gyűjteménye megvalósítja a "cella CT" funkcióját.
A kolokalizációs eredmények pontossága szorosan összefügg a kép felbontásával, ezért a kolokalizációs kísérletek végzésekor nagyobb felbontású képalkotási módszert kell választanunk. A hagyományos mikroszkópokhoz képest a konfokális mikroszkópia a kolokalizációs kutatás hatékony eszközévé vált nagy felbontású előnyei miatt.
A diffrakciós határ megléte miatt a hagyományos konfokális optikai felbontás 200 nm körül van. Ha 200 nm-nél nagyobb struktúrákat kell megfigyelnünk, a konfokális pontosan meg tudja határozni a kolokalizáció mértékét. Ha kolokalizációs elemzésre van szükség, a konfokális szoftverrel felszerelt kolokalizációelemző modul választható.
