A transzmissziós fluoreszcencia mikroszkópia és a reflexiós fluoreszcens mikroszkópia közötti különbség
1. Transzmissziós fluoreszcenciás mikroszkóp: A gerjesztő fényforrást a minta anyagán egy kondenzátoron keresztül továbbítják a fluoreszcencia gerjesztésére. Az általánosan használt sötét mező koncentrátorok vagy közönséges koncentrátorok használhatók a reflektor beállítására, hogy a gerjesztő fényt és az oldalsó fényt a mintára alakítsák. Ez egy viszonylag régimódi fluoreszcens mikroszkóp. Előnye az erős fluoreszcencia kis nagyításnál, hátránya viszont, hogy a fluoreszcenciája gyengül a nagyítás növelésével. Ezért jobb nagyobb mintaanyagok megfigyelésére.
2. Esősugaras fluoreszcens mikroszkóp: Ez egy új típusú fluoreszcens mikroszkóp, amely a modern időkben fejlődött ki. Az előzőtől eltérően a gerjesztő fény az objektív lencséjéről esik le a próbatest felületére, ugyanazt az objektívlencsét használva, mint a megvilágító kondenzátor és a fluoreszcencia gyűjtésére szolgáló objektív. Az optikai úthoz egy kétszínű sugárnyaláb elválasztót kell hozzáadni, amely 45 fokos szöget zár be a fotouránnal. A gerjesztő fény visszaverődik az objektívlencsén, és összegyűlik a mintán. A minta által generált fluoreszcencia és az objektívlencse és a fedőüveg felületéről visszaverődő gerjesztő fény egyszerre jut be az objektívbe, és tér vissza a kettős színsugaras elválasztóba, elválasztva a gerjesztő fényt és a fluoreszcenciát. A maradék gerjesztő fényt ezután elnyeli a blokkoló szűrő. A gerjesztő szűrők, a kettős színsugaras szeparátorok és a blokkoló szűrők különböző kombinációinak alkalmazása esetén ezek kielégíthetik a különböző fluoreszcens reakciótermékek igényeit. Ennek a fluoreszcens mikroszkópnak az előnyei az egyenletes látómező megvilágítás, a tiszta képalkotás és az erősebb fluoreszcencia nagyobb nagyítás mellett.
A transzmissziós fluoreszcens mikroszkópia előnyei és hátrányai
Fényforrás: nagynyomású higanylámpa vagy halogénlámpa.
Spotlámpa tükör: Sötét mező spotlámpa használata a gerjesztés és a fluoreszcencia elkülönítésére.
Objektív lencse: Bármilyen típusú objektív használható.
Példány: A vékony minták alkalmasabbak transzmissziós megfigyelésre.
Előnyök: ① A sötét mezős kondenzátor használatának köszönhetően a gerjesztő fény nem tud bejutni az objektívbe, így könnyű sötét hátteret képezni és jó kontrasztot elérni, és bármilyen objektív használható megfigyelésre. ② Ha kis nagyítású objektívet használ, az fényesebb, mint a visszaverő fluoreszcens mikroszkóp.
Hátránya: A reflektor középpontját és magasságát helyesen kell beállítani, különben nem készíthető fényes fluoreszkáló kép. A sötét mezős spotlámpa fókusztávolság-korlátozása miatt vastag üveglemezek nem használhatók. A látómező megvilágítási területe ne legyen túl nagy, különben a fluoreszcens minta fluoreszcens színe elhalványulhat. A vastag vagy átlátszatlan minták nem alkalmasak.
