Festéstechnikák és mikroorganizmusok mikroszkópos megfigyelése
A baktériumok egyszerű festése
1 Célok
1.1 A mikrobiális kenet és festés alapvető technikáinak elsajátítása.
1.2 A baktériumok egyszerű festési módszerének elsajátítása.
1.3 A baktériumok morfológiai jellemzőinek megismerése, az olajtükör használatának és az aszeptikus műveleti technikák elsajátításának megszilárdítása.
2 Alapelv A baktériumok kenése és festése a mikrobiológiai kísérletek alaptechnikája. A baktériumok sejtjei kicsik és átlátszóak, a közönséges fénymikroszkóp alatt nem könnyű felismerni őket, festeni kell őket. Egyetlen festék alkalmazása a baktériumok megfestésére, hogy a megfestett szervezet és a háttér egyértelmű színkülönbséget képezzen, így azok morfológiája és szerkezete jobban megfigyelhető. Ez a módszer könnyen kivitelezhető, alkalmas a szervezet általános alakjának és a baktériumok elrendeződésének megfigyelésére. Az alkáli festékeket általában egyszerű festésre használják, mert semleges, lúgos vagy gyengén savas oldatban a baktériumsejtek általában negatív töltésűek, és ha lúgos festékeket ionizálnak, akkor molekuláik festő része pozitív töltésű, így a lúgos festékek festő része. könnyen kötődhet a baktériumokhoz, hogy a baktériumok elszíneződjenek. A megfestett baktériumsejtek élesen elütnek a háttértől, és mikroszkóp alatt könnyebben felismerhetők. Az egyszerű festéshez általánosan használt festékek közé tartozik a merociánkék, a kristályibolya és az alapvegyület vörös. Amikor a cukor bakteriális lebontása során savat állítanak elő, így a tápközeg pH-ja csökken, a baktériumok pozitív töltése megnő, majd vörös, savas vörös vagy kongó vörös és egyéb savas festékek festésére használható. A baktériumokat festés előtt rögzíteni kell. Célja kettős: az egyik a baktériumok elpusztítása, és a baktériumok rátapadása a tárgylemezre; a második az affinitásának növelése a festékhez. Általában két módszert alkalmaznak: melegítést és kémiai rögzítést. Rögzítéskor próbálja megőrizni a sejtek eredeti morfológiáját.
3 Anyagok
3.1 Bacillus subtilis törzs 12-18h tápagar ferde kultúra, Staphylococcus aureus kb. 24 órás tápagar ferde kultúra, Escherichia coli 24 órás tápagar ferde kultúra, sütőélesztő agar ferde kultúra.
3.2 A Lue-féle lúgos metilénkék festés (vagy ammónium-oxalát kristályibolya festés), karbolsavvegyület vörös folt.
3.3 Műszerek vagy egyéb kellékek Mikroszkóp, alkohollámpa, tárgylemez, oltógyűrű, tárgylemeztartó, kétrétegű palack (cédrusolajjal és xilollal töltve), mikroszkóppapír, fiziológiás sóoldat vagy desztillált víz stb.
4 Eljárás Kenet → szárítás → rögzítés → festés → mosás → szárítás → mikroszkópos vizsgálat.
5 lépés
5.1 kenet Vegyünk két tiszta és olajmentes tárgylemezt, mindegyiket egy kis csepp sóoldattal (vagy desztillált vízzel) a tárgylemez közepén, aszeptikus körülmények között, egy oltógyűrűvel, hogy aszeptikusan működjön a Bacillus subtilis, Garcinia micrococcus. és az Escherichia coli ferdén szed egy kis mohát a vízcseppbe, összekeverve és filmmel bevonva. Ha a bakteriális szuszpenzió (vagy folyékony tenyészet) kenetet, akkor a gyűrű beoltására használható 2-3 gyűrűt közvetlenül a tárgylemezre. Vegye figyelembe, hogy a sóoldat (desztillált víz) és a baktériumok nem lehet túl sok, és egyenletesen, nem túl vastag.
5.2 Szárítás Természetes módon, szobahőmérsékleten szárítjuk. Úgy is szárítható, hogy a bevonatos oldalával felfelé egy alkohollámpa fölé melegítjük. Ne kerüljön azonban túl közel a lánghoz, mert a túl magas hőmérséklet elpusztítja a baktériumok morfológiáját.
5.3 Rögzítés Hőszárítás alkalmazása esetén a rögzítést és a szárítást egyetlen lépésben egyesítjük, ugyanúgy, mint a szárítást. Kenje be, szárítsa meg és hővel rögzítse.
5.4 Festés Helyezze a tárgylemezt laposan a tárgylemezpolcra, és adjon 1-2 csepp festőoldatot a kenetre (a festőoldat csak a kenetfilmet fedi el). Fessük meg a kenetet Lü's Basic Mellanox Blue-val 1-2 percig, és karbonátvörössel (vagy ammónium-oxalát kristályibolyával) körülbelül 1 percig.
5.5 Öblítés Öntse le a festőoldatot, és óvatosan öblítse le csapvízzel a tárgylemez egyik végéről, amíg a kenetről lefolyó víz színtelenné válik. Öblítéskor ne engedje, hogy a víz közvetlenül lemosódjon a bevont felülettel. A víz áramlása nem lehet túl gyors vagy túl nagy, hogy elkerülje a kenetfilm elmozdulását.
5.6 Szárítás Rázza le a tárgylemezről a vízcseppeket, hogy természetes módon száradjon, szárítsa meg, vagy nedvszívó papírt használhat a száraz felszíváshoz (vigyázzon, hogy ne törölje le a baktériumtestet). 5.7 Mikroszkópos vizsgálat A kenetet megszárítjuk és mikroszkóppal megvizsgáljuk. A kenetnek teljesen meg kell száradnia, mielőtt olajmikroszkóppal megfigyelhető lenne.
6 Eredmények Rajzolja fel az E. coli és a Micrococcus garciniae morfológiáját egyszeri festés után!
Gram-festés
1. Cél
1.1 Megérteni a Gram-festés elvét és jelentőségét a baktériumok osztályozásában és azonosításában.
1.2 A Gram-festési technika elsajátítása és elsajátítása, valamint a fénymikroszkóp olajlencséjének használatának elsajátításának megszilárdítása.
