A fluoreszcens mikroszkópos minta előkészítési követelményei
A fluoreszcens mikroszkópos minta előkészítésének követelményei
(1) Csúszda
A csúszóüveg vastagságának 0.8-L2 mm között kell lennie. A túl vastag tárgylemez egyrészt több fényt nyel el, másrészt nem tudja a gerjesztő fényt a mintára fókuszálni. A tárgylemezeknek simának, egyenletes vastagságúnak és nyilvánvaló autofluoreszcenciától mentesnek kell lenniük. Néha kvarclemezeket használnak.
(2) Takaróüveg
A fedőüveg vastagsága körülbelül 0,17 mm, sima. A gerjesztő fény erősítésére interferencia fedőüveg is használható, amely egy speciális fedőüveg, amely több réteg anyaggal (például magnézium-fluoriddal) van bevonva, amelyek különböző zavaró hatást fejtenek ki a különböző hullámhosszúságú fényre, ami a fluoreszcencia sima. A gerjesztő fény áthalad, és a gerjesztő fény visszaverődik, és ez a visszavert gerjesztő fény gerjesztheti a mintát.
(3) Példa
A szövetszeletek vagy más minták nem lehetnek túl vastagok. Ha a vastagság túl vastag, a gerjesztő fény nagy része a minta alsó részében fogyasztódik el, míg az objektívlencse által közvetlenül megfigyelt felső rész nem gerjeszthető teljesen. Ezenkívül az átfedő sejtek vagy szennyeződések által okozott fluoreszcencia, a háttér nem specifikus festődése befolyásolja az ítéletet.
(4) tükörolaj
Általában, ha a mintákat sötétmezős fluoreszcens mikroszkóppal és olajimmerziós mikroszkóppal vizsgálja, immerziós olajat kell használni. A legjobb, ha speciális, nem fluoreszkáló immerziós olajat használ. Használható helyette glicerin is, illetve folyékony paraffin is, de a törésmutatója alacsony, ami enyhén befolyásolja a képminőséget.
A fluoreszcens mikroszkóp fénykockájának megértése
A fluoreszcencia az a fény, amely során az anyag elektronjai elnyelik a fényenergiát az alacsony energiájú állapotból a nagy energiájú állapotba, majd fényt bocsátanak ki, amikor visszatér alacsony energiájú állapotba. Ez nem hőmérsékleti sugárzott fény – lumineszcencia. Vagyis: az anyag elnyeli a rövidhullámú fényt, gerjesztett állapotba kerül, és hosszú hullámú fényt bocsát ki.
Legyen szó az anyag autofluoreszcenciájáról, a fluoreszcens festékről vagy a fúzióval kifejezett fluoreszcens fehérjéről, azt egy meghatározott fényhullámhosszal kell gerjeszteni (Gerjesztés). Miután az elektronok vándorolnak és energiát veszítenek, meghatározott hosszú hullámhosszú fényt bocsátanak ki (emisszió). , amelyet a detektáló rendszer összegyűjthet, hogy elérje a specifikus fluoreszcencia azonosítását.
Mi az a fluoreszkáló fénykocka?
A fluoreszcens mikroszkópos megfigyelés és képalkotás során a specifikus hullámhosszú gerjesztő fényt és a megfelelő hosszú hullámhosszú emissziós fényt a fluoreszcens fénykocka biztosítja, így a fluoreszcencia jelet szabad szemmel, kijelzővel vagy kamerával lehet gyűjteni. Ezért a fluoreszcens fénykocka határozza meg, hogy mit lehet kimutatni. A fluoreszcencia jel kulcsfontosságú eszköze, jellemzői közé tartozik az EX: gerjesztési hullámhossz-szűrő paraméterei, az EM: az emissziós hullámhossz-szűrő paraméterei és a DM: a dichotóm tükör paraméterei. Vegyük például a Revolve integrált fluoreszcens mikroszkóp DAPI fénykockáját, EX: 385/30, EM: 450/50, DM: 425.
The light emitted by the light source passes through DAPI EX to obtain excitation light in a specific wavelength range, that is, light of 385±15nm, which specifically excites fluorescent substances that can only be excited within this range; the DM dichroic mirror separates the excitation light from the fluorescence Optical elements, as special mirrors, reflect only specific wavelengths of light and allow all other wavelengths to pass through, so only >425 nm-es fény továbbítható az EM-be; EM emissziós szűrőket használnak a fluorofor által kibocsátott fluoreszcenciának a többi háttértől való elválasztására. Optikai elemek a fény elválasztására. Az emissziós szűrők a fluoreszcencia hullámhosszúságú fényt sugározzák át a dikroikus tükörön, miközben blokkolják az összes többi fényt, amely a gerjesztő fényforrásból szivárog (a mintáról vagy az optikáról visszaverődik). A kibocsátott fény hullámhossza nagyobb, mint a megfigyelhető EM, azaz csak a 450±25 nm tartományba eső fény jut be a detektorrendszerbe. Az EX, EM szűrők és DM dichotómiák megfelelő kiválasztása segíthet a kutatóknak magasabb jel-zaj arány (S/N) elérésében.
