A mikroszkópos rutin minták előkészítésének követelményei
A konfokális mikroszkóp egy korszakalkotó csúcstechnológiás új termék, amelyet az 1980-as években fejlesztettek ki, és ma a molekuláris biológia és az élettudomány egyik fontos analitikai eszköze. A konfokális mikroszkópia fluoreszcens mikroszkópos képalkotáson alapul, lézeres letapogató berendezéssel, számítógép segítségével a képfeldolgozáshoz, hogy fluoreszcens képeket kapjunk a sejteken vagy szöveteken belüli mikrostruktúrákról, és megfigyeljék számos fiziológiás jelgép morfológiájában bekövetkező változásokat szubcelluláris szinten. Legyen hatékony kutatási eszköz a morfológia, molekuláris sejtbiológia, idegtudomány, farmakológia, genetika és más tudományos területeken.
A minta előkészítése a konfokális mikroszkópiához kritikus lépés a detektálás előtt. A mintákat fluoreszcens szondákkal kell jelölni (egyszeres, dupla, háromszoros).
a
A minták lehetnek rögzített vagy élő szövetek, vagy rögzített vagy élő tapadó tenyészetek. A sejteket Confocal speciális kis tenyésztőedényeken vagy fedőlemezeken kell tenyészteni. Felfüggessze a sejteket, rázza fel vagy dobja le a szeleteket, és fedje le fedőlemezekkel fedőfóliával. A minta Zda vastagsága körülbelül 1–2 mm, a használt fedőüveg vastagsága 0,17 mm-nél kisebb, a csúszóüveg vastagsága pedig 0,8–1,2 között legyen. mm, a felület sima, a vastagság egyenletes, és nincs nyilvánvaló interferencia fluoreszcencia. Rögzített mintákhoz gyakran használnak rögzítőközeget, és általában 8-as pH-jú PBS-ben készített glicerint használnak.5-9 a rögzítéshez.
A rutin minta-előkészítés követelményei:
1. Színezékek kiválasztása
Mivel a konfokális mikroszkóp egy hullámhosszú lézert használ fényforrásként, a fluoreszcens festékek kiválasztásánál a konfokális mikroszkóppal felszerelt lézer hullámhosszát kell alapul venni. Ha ugyanabban a mintában több fluoreszcens festék is van, akkor lehetőség szerint figyelembe kell venni azok emissziós hullámhosszát is. Ne fedje át egymást, hogy elkerülje a keresztszínek problémáit.
2. Mintahordozó kiválasztása
A konfokális mikroszkóp nagy teljesítményű objektívlencséje általában olajlencse, numerikus rekesznyílása kicsi, és a lencse és a minta közötti munkatávolság nem lehet nagyobb 0,17 mm-nél. A diák és a fedőlemezek rendben vannak. Ha szuszpendált sejtekről vagy szuszpendált részecskékről van szó, egy konfokális mikroszkóphoz dedikált Petri-csésze használható a minta megfigyelésre történő szállítására.
3. A szerelési közeg kiválasztása
Ha a mintát csak egyszer kell megfigyelni, és a fluoreszcenciát nem lehet könnyen kioltani, választhat egy bizonyos koncentrációjú glicerin keveréket a tárgylemez lezárásához. Ha a mintát egy bizonyos időre el kell helyezni, és többször kell venni, akkor a fluoreszcens jelek elvesztésének csökkentése érdekében antifluoreszcens kioltó rögzítőközeget kell választani.
