Mikrobák mennyiségének mérése - Mikroszkópos közvetlen számlálási módszer!
A baktériumpopulációk növekedését a sejtek számának növekedése vagy a sejtanyag növekedése jellemzi. Számos módszer létezik a sejtek számának mérésére, beleértve a közvetlen mikroszkópos számlálást, a lemezszámot, a spektrofotométeres turbometriát, a legvalószínűbb MPN-számot és a membránszűrést. A celluláris anyagok mérésére szolgáló módszerek közé tartozik a sejtek száraz tömegének mérése, a sejtek bizonyos komponenseinek, például a nitrogén, az RNS és a DNS tartalmának mérése, valamint az anyagcseretermékek mérése. Összefoglalva, számos módszer létezik a mikrobiális növekedés mérésére, mindegyiknek megvannak a maga előnyei és hátrányai, és a kiválasztásnak a munka konkrét követelményei alapján kell történnie. Ez a kísérlet elsősorban a termelési és tudományos kutatómunkában általánosan használt mikroszkópos közvetlen számlálási módszert mutatja be.
Célkövetelmények
1. Tisztázza a vérsejtszámláló tábla használatának elvét a számláláshoz!
2. Sajátítsa el a vérsejtszámláló tábla mikrobaszámláláshoz való használatának módszerét.
2, Alapelvek
A mikroszkópos közvetlen számlálási módszer egy egyszerű, gyors és intuitív módszer a minta kis mennyiségű szuszpenziójának mikroszkóp alatt történő közvetlen megszámlálására úgy, hogy azt egy speciális, meghatározott területű és térfogatú üveglemezre helyezik (más néven baktériumszámláló). Jelenleg az itthon és külföldön általánosan használt baktériumszámláló eszközök közé tartoznak a vérsejtszámláló lemezek, a Peteroff Hauser baktériumszámláló készülékek és a Hawksley baktériumszámláló készülékek, amelyek mindegyike használható élesztő-, baktérium-, gombaspórák stb. szuszpenziók számlálására. ugyanazzal az alapelvvel. Az utóbbi két típusú baktériumszámláló össztérfogata {{0}},02 mm3 fedőüveggel letakarva, és a fedőüveg és a hordozólemez közötti távolság mindössze 0,02 mm. Ezért egy olajimmerziós objektív használható kisebb sejtek, például baktériumok megfigyelésére és megszámlálására. Ezen baktériumszámlálókon kívül létezik egy becslési módszer is a kenetterület és a szántóterület arányának mikroszkóp alatti közvetlen megfigyelésére, amelyet általában a tej bakteriológiai vizsgálatára használnak. A mikroszkópos közvetlen számlálás előnyei intuitívak, gyorsak és könnyen kezelhetők. De ennek a módszernek az a hátránya, hogy a mért eredmények általában az elhalt és élő sejtek összege. Jelenleg vannak olyan módszerek, amelyek kiküszöbölhetik ezt a hátrányt, például az élő sejtfestő kamra tenyészetének kombinálása (rövid ideig) és sejtosztódást gátló anyagok hozzáadásával, hogy elérjük azt a célt, hogy csak élő sejteket számoljunk.
Vérsejtszámláló tábla használata példaként a mikroszkóp alatti közvetlen számláláshoz. A másik két baktériumszámláló felhasználási módjai megtalálhatók a különböző gyártók kézikönyveiben. A mikroszkóp alatti közvetlen számlálás vérsejtszámláló lemez segítségével a mikrobiális számlálás általánosan használt módszere. A számlálótábla egy speciálisan készített üvegcsúszda, amelyen négy horony három platformot alkot; A középső szélesebb platformot egy rövid vízszintes horony két félre osztja, és a platform mindkét oldalán egy rács található. Minden rács kilenc nagy rácsra van felosztva, és a középső nagy rács a számláló szoba. A vérsejtszámláló lemez szerkezetét az l{{0}} ábra mutatja. A számláló szoba méretarányának általában két specifikációja van. Az egyik az, hogy egy nagy négyzetet 25 középső négyzetre osztanak, és minden négyzetet tovább osztanak 16 kis négyzetre (15-2 ábra); Egy másik módszer az, hogy egy nagy négyzetet 16 középső négyzetre osztunk, és minden négyzetet tovább osztunk 25 kis négyzetre. Azonban a számlálótábla méretétől függetlenül minden nagy négyzetben 400 kis négyzet található. Ha minden négyzet oldalhossza 1 mm, akkor minden nagy négyzet területe lmm2. Takaróüveggel való letakarás után a fedőüveg és a tárgylemez közötti magasság 0,1mm, így a számlálószoba térfogata 0,1mm3 (egy ezred milliliter). 15-1 ábra A vérsejtszámláló tábla szerkezete (I) 15-2 ábra A Vérsejtszámláló tábla felépítése (II) Elölnézet; B. Függőleges metszeti nézet; A kibővített rács közepén egy nagy négyzet található, mint a számláló szoba 1. Vérsejtszámláló tábla; 2. Takaróüveg; A számlálószobában történő számláláskor általában öt négyzetre számítják ki a teljes baktériumszámot, majd megkapják az egyes négyzetek átlagos értékét, megszorozva 25-tel vagy 16-tal, hogy megkapjuk a teljes baktériumszámot egy nagy négyzetben, amelyet aztán átszámítanak teljes baktériumszám az lml bakteriális oldatban. Feltéve, hogy a teljes baktériumszám öt négyzetrácsban A, a baktériumoldat hígítási tényezője pedig B. Ha 25 számlálólemez van a négyzetrácsban, a teljes baktériumszám 1 ml baktériumoldatban A/5 × 25 × 104 × B=50000A · B. Hasonlóképpen, ha 16 számlálólemez van a négyzetrácsban, a teljes baktériumszám 1 ml baktériumoldatban A/5 × 16 × 104 × B=32000A · B
