Bevezetés a többfoton lézeres pásztázó mikroszkópok előnyeibe és hátrányaiba
A többfoton lézeres pásztázó mikroszkóp előnyei:
1. Vörös vagy infravörös fénnyel gerjesztve a fényszórás kicsi, a kis részecskék szóródása pedig fordítottan arányos a hullámhossz negyedik hatványával.
2. A képalkotó keresztmetszetből több szórt foton{1}}begyűjthető tűlyukak nélkül.
3. A tűlyukak nem tudják megkülönböztetni a defókuszált vagy fókuszterületekről kibocsátott szórt fotonokat, és a többfotonok jobb jel-/-zaj arányt mutatnak a mélyképalkotásban.
4. Az egyfotonos gerjesztéshez használt ultraibolya vagy látható fényt a minta könnyen elnyeli és gyengíti, mielőtt a nyaláb elérné a fókuszsíkot, ami megnehezíti a mély rétegek gerjesztését.
5. A biológiai mikroszkópos megfigyelés során az első szempont, hogy magának a szervezetnek az aktív állapotát ne sértse, fenntartsa a víz, az ionkoncentráció, az oxigén és a tápanyagok keringését. A fénymegfigyelés területén mind a hő-, mind a fotonenergiának a besugárzási dózison belül kell maradnia, illetve a sejteket nem károsító fényenergiának.
6. A többfoton mikroszkópiának számos előnye van. A három-dimenziós felbontás, a mélységi invázió, a szórási hatékonyság, a háttérfény, a jel-/-zaj arány, a szabályozás stb. tekintetében vannak olyan jellemzők, amelyekkel a korábbi lézermikroszkópok nem rendelkeznek, vagy nem tudnak felülmúlni.
A többfoton lézeres pásztázó mikroszkóp hátrányai:
1. Csak fluoreszcens képalkotáshoz.
2. Ha a minta olyan kromoforokat tartalmaz, amelyek elnyelik a gerjesztő fényt, a minta hőkárosodásnak lehet kitéve.
3. A felbontás enyhén csökkent, bár konfokális kis lyukak egyidejű kihasználásával javítható, jelveszteség van.
4. A drága ultragyors lézerek korlátai miatt a többfotonos pásztázó mikroszkópok költsége viszonylag magas.
