Hogyan válasszuk ki a megfelelő fluoreszcens mikroszkópot
A fluoreszcens mikroszkóp szabványos mikroszkópos képalkotó berendezés laboratóriumok és patológiai osztályok számára. Fluoreszcencia jellemzőket használ megfigyeléshez és képalkotáshoz. Széles körben használják a sejtbiológiában, neurobiológiában, botanikában, mikrobiológiában, patológiában, genetikában és más területeken. A fluoreszcens képalkotás előnye a nagy érzékenység és nagy specificitás, és kiválóan alkalmas specifikus fehérjék és organellumok szövetekben és sejtekben való eloszlásának megfigyelésére, kolokalizáció és kölcsönhatás vizsgálatára, életdinamikus folyamatok, például ionkoncentráció változásainak követésére. stb.
Mikroszkóp választása
A fluoreszcens mikroszkópok alapvetően három kategóriába sorolhatók: álló fluoreszcens mikroszkópok (metszetvágásra alkalmas), fordított fluoreszcens mikroszkópok (élő sejtek számára alkalmasak, figyelembe véve a metszeteket), sztereoszkópikus fluoreszcens mikroszkópok (nagyobb minták, például növények, zebradánok (felnőtt/ embrió), medaka, egér/patkány szervek stb.).
Fluoreszcens szűrőkockák kiválasztása
A fluoreszcens szondák gerjesztési és emissziós hullámhosszának figyelembevétele mellett a szűrőblokkok kiválasztásánál azt is figyelembe kell venni, hogy van-e nem specifikus gerjesztés és keresztszín a több színnel jelölt mintáknál. A kísérletben megpróbáljuk a gerjesztéshez a gerjesztési csúcshoz legközelebb eső hullámhosszt választani, és a vételi tartománynak tartalmaznia kell az emissziós csúcsot. Például az Alexa Fluor 488 gerjesztési csúcsa 500 nm, és egy 480/40 gerjesztési szűrőt lehet kiválasztani egy fluoreszcens mikroszkópban. A fluoreszcens mikroszkópokban általánosan használt fluoreszcens szűrőkockák két típusra oszthatók: long pass (röviden LP) és sáváteresztő (röviden BP), amelyeket szintén az igények szerint kell kiválasztani.
Fluoreszkáló fényforrás választása
A jelenleg általánosan használt fluoreszkáló fényforrások közé tartoznak a higanylámpák, a fémhalogén lámpák és a LED-es fényforrások, amelyek az elmúlt években gyorsan fejlődtek. A fluoreszkáló fényforrás spektruma folytonos és nem folytonos, az energia pedig eltérő lesz a különböző sávokban. Viszonylag szűk spektrális sávja, stabilabb energiakibocsátása, hosszú élettartama, biztonsága és környezetvédelme, valamint számos egyéb előnye miatt a LED fényforrás fokozatosan a fluoreszcens mikroszkóp fő fényforrásává válik.
konfokális mikroszkóp
A hagyományos fluoreszcens mikroszkópos megfigyelésben a fluoreszcens marker anyagok és az autofluoreszcens struktúrák átfedése miatt ezek szorosan kombinálódnak, míg a hagyományos epifluoreszcens mikroszkóp objektív nem csak a fókuszsík fényét gyűjti, hanem a szórt fényt is összegyűjti a fluoreszcens marker anyagok és az autofluoreszcens struktúrák között. fókuszsík, ami jelentősen csökkenti a képfelbontást és a kontrasztot.
A konfokális képalkotás úgy oldja meg ezt a problémát, hogy a fénynek csak a fókuszsíkról visszaverődő részét érzékeli. A fényforrás egy tűlyukon halad át, és kicsi és finom fényfoltot képez a fókuszsíkon. A fókuszsíkból kibocsátott fényt az objektív gyűjti össze. Az objektívlencse fókuszsíkja feletti vagy alatti pontból kibocsátott fluoreszcencia nagy része nem tud konvergálni a kis lyukhoz. Csak a fókuszsíkban található fluoreszcencia és a fókuszon kívüli fluoreszcencia egy kis része tud áthaladni a tűlyukon, míg a fókuszsíkon kívüli fénysugarak a lyuklemez elején vagy hátulján konvergálnak, és nem jutnak be a detektorba. a tűlyuk. Az észlelt kép a fókuszsíkról készült kép, így a végső képminőség jelentősen javul.
A lézeres pásztázó konfokális mikroszkóp előnyei és funkcióinak megvalósíthatósága miatt a konfokális mikroszkóp nélkülözhetetlen kísérleti asszisztens a nagy pontosságú sejtbiológia, botanika és sejtkutatás területén. Ugyanakkor a jövőbeni tudományos kutatóközpontban ez lesz a legalapvetőbb és legfontosabb tudományos kutatási eszköz.
