Mennyit tud a fluoreszcens mikroszkópiáról?
A fluoreszcens mikroszkópok általában nagy intenzitású higanylámpákat használnak gerjesztő fényforrásként. A szűrőket a nem kívánt fény kiszűrésére használják, így csak a nagy intenzitású, tiszta fény marad meg, amely gerjeszti a fluorofort. Miután a monokromatikus fény besugározza a mintát az objektívlencsén keresztül, a mintát gerjesztik, hogy fényt bocsátanak ki (fluoreszcencia), és mind a fluoreszcencia, mind a gerjesztő fény visszatér az objektívlencse optikai útja mentén. Ebben az esetben a gerjesztő fény szűréséhez dikroikus tükör szükséges. , csak a szükséges fluoreszcenciát engedjük át.
Ez a fluoreszcencia a mikroszkóp fényútja mentén éri el a szemlencsét, majd a szemünkbe jut, ahol láthatjuk a fluorofor által kibocsátott fluoreszcenciát.
A fluoreszcens mikroszkóp előzetes ellenőrzése és beállítása:
(1) Minden egyes fluoreszcencia-megfigyelés előtt rutinszerűen ellenőrizni kell a fluoreszcens eszköz izzószál-igazítását, optikai útfókuszát, apertúra-membránt és membránbeállításokat.
(2) A szükséges fluoreszcens gerjesztő/emissziós szűrőegység be van-e szerelve a konverterbe, a fluoreszcens mikroszkóp objektívlencséje megfelelően van-e konfigurálva, és távolítsa el az olajfoltokat és a port az objektívlencse elülső lencséjén.
(3) Ha az áteresztett fény fáziskontraszt-megfigyelését egyidejűleg végezzük, akkor ellenőrizni kell a konjugátor középpontjának és az objektívlencsével szemben lévő fáziskontraszt gyűrű konjugációját.
(4) Ellenőrizze, hogy a mintatartót (diaüveg, fedőüveg és egyéb edények) nem fedi-e el folyadék vagy por, és hogy a vastagsága az objektívlencse kalibrált munkatávolság-tartományán belül van-e. A szeletelt minta nem lehet túl vastag, lehetőleg 10 μm-nél kisebb vagy azzal egyenlő.
(5) Mivel a fényforrás ultraibolya sugarakat tartalmaz, a színpad eleje fölé barna fényvédő lemezt helyeznek el, hogy az ultraibolya sugarak ne károsítsák a retinát.
(6) A feszültség instabilitása csökkenti a nagynyomású higanylámpa élettartamát, és a fényforrás tápegysége feszültségstabilizátorral van felszerelve.
(7) A higanylámpa élettartamának meghosszabbítása érdekében a bekapcsolás után 15 perccel lekapcsolható; a higanylámpa fénycsöves teljesítményének kikapcsolása után legalább 10 percet kell várnia, amíg a higanygőz újraindul, hogy lehűljön és visszatérjen az eredeti állapotba, különben ez befolyásolja a lámpa élettartamát.
Képmegfigyelés fluoreszcens mikroszkóppal:
(1) Körülbelül 5-10 perccel a fluoreszcens fényforrás bekapcsolása után a gerjesztő fény intenzitása általában stabil, és a minta betöltődik megfigyelésre; a minta túlzott gerjesztőfény által okozott fluoreszcencia kioltásának elkerülése érdekében a fókuszálás és a tárgyak keresése során először kicsinyítse le a fluoreszcens mikroszkópot Állítsa a gerjesztő fényt közepes intenzitásra rekeszmembránnal vagy adjon hozzá ND szűrőt, és rendszeresen mozgassa a mintafokozatot. A tükörkép megerősítése után állítsa be a fluoreszcens állapotot a fényképezéshez és a rögzítéshez.
(2) Beállítások a rossz képminőség miatt. A minta-előkészítési tényezők mellett a szükséges módosítások a következők:
① Kizárja a fényárnyékoló vagy fénykorlátozó eszközöket a képalkotó optikai úton, például DIC-tartozékokat, ND-szűrőket stb.
② Állítsa be újra a vevő fókuszát és a fluoreszcens mikroszkóp rekeszmembrán méretét.
③ Óvatosan állítsa be a fluoreszcens mikroszkóp objektívlencséjének fedési különbség korrekciós gyűrűjét.
A fluoreszcens mikroszkóp alkalmazási pontjai
A fluoreszcencia mikroszkópia "aktinikus fluoreszcens" képalkotást alkalmaz. Ha a kiválasztott gerjesztési hullámhossz a közeli ultraibolya tartományban (320-400nm) van, amely szabad szemmel nem látható, a fluoreszcencia emissziós spektruma is rövidebb, mint a hagyományos fénytükör fényforrások átlagos hullámhossza. javítani. A nagy energiájú fotonok elektronokkal ütköznek, aminek következtében az elektronok az alapállapotból a gerjesztett állapotba kerülnek. A gerjesztett állapotban lévő elektronok nagyon instabilak, és visszaesnek az alapállapotba. Ebben a folyamatban a hőenergia egy része elfogy, és új fotonok bocsátanak ki. Az új foton energiája alacsonyabb, mint az eredeti fotoné, ezért hosszabb a hullámhossza. Mivel az új foton hullámhossza eltér a beeső fény foton hullámhosszától, a két különböző hullámhosszú fénynyalábot egy bizonyos optikai feldolgozási módszerrel elválasztjuk, így csak a kibocsátott új fotonokat (fluoreszcens jel) látjuk, azaz a fluoreszcens mikroszkóp fluoreszcens képeket lát.
