Fluoreszcens mikroszkópos műszaki paraméterek Fluoreszcencia mikroszkópos technikák és módszerek
Fluoreszcens mikroszkóp műszaki paraméterei 1. Széles látószögű szemlencse 2. Akromatikus objektívlencse 3. Négylyukú objektívlencse konverter 4. Epi-fluoreszcens készülék Kék (B) Zöld (G) gerjesztő rendszer 100W higanylámpa 5. Koaxiális durva és finom fókusz beállító mechanizmus: beállítás Fókusztartomány: 15mm Mikromozgás rács értéke: 0,002mm 6. Kétrétegű mechanikus asztal Hosszirányú mozgási tartomány: 70mm Oldalirányú mozgási tartomány: 50mm
Fluoreszcens mikroszkóp műszaki paraméterei
1. Széles látószögű okulár
2. Akromatikus objektív
3. Négy nyílású orrrész
4. Epi-fluoreszcens készülék kék (B) zöld (G) gerjesztő rendszer 100W higanylámpa
5. Koaxiális durva és finom fókuszbeállító mechanizmus: fókusztartomány 15 mm finom mozgási rácsérték 0,002 mm
6. Kétrétegű mechanikus munkapad
Függőleges mozgási tartomány: 70 mm Oldalirányú mozgási tartomány: 50 mm
Fluoreszcens mikroszkópos ismeretek és módszerek
(1) Csúszda
Az üveglemez vastagságának 0,8 és 1,2 mm között kell lennie. A túl vastag tárgylemez egyrészt több fényt nyel el, másrészt a gerjesztő fényt nem lehet a mintára koncentrálni. A tárgylemezeknek simának, egyenletes vastagságúnak és nyilvánvaló autofluoreszcenciától mentesnek kell lenniük. Néha kvarcüveg tárgylemezeket használnak.
(2) Takaróüveg
A fedőüveg vastagsága körülbelül 0,17 mm, sima. A gerjesztő fény erősítésére interferencia fedőüveg is használható, amely egy speciális fedőüveg, amely több réteg anyaggal (például magnézium-fluoriddal) van bevonva, amelyek különböző zavaró hatást fejtenek ki a különböző hullámhosszúságú fényre, ami a a fluoreszcencia simán megy. Izgalmas fény halad át és visszaverődik, és ez a visszavert gerjesztő fény gerjeszti a mintát.
(3) Példa
A szövetszeletek vagy más minták nem lehetnek túl vastagok. Ha túl vastag, akkor a gerjesztő fény nagy részét a minta alsó része fogyasztja el, míg az objektívlencse által közvetlenül megfigyelt felső rész nem lesz teljesen gerjesztve. Ezenkívül a cellák átfedése vagy a szennyeződés fedése befolyásolja az ítéletet.
(4) Rögzítőszer
Rögzítőszerként általában glicerint használnak, amelynek nem lehet autofluoreszcenciája, színtelen és átlátszó, a fluoreszcencia fényereje pedig világosabb pH 8.{1}},5-nél, és nem könnyű gyorsan elhalványulni. Ezért glicerin és 0,5 mol/l karbonát pufferoldat egyenlő arányú keveréke, amelynek pH-ja 90 és 9,5 között van, általában kötőanyagként használatos.
(5) tükörolaj
Általában, ha a mintákat sötétmezős fluoreszcens mikroszkóppal és olajimmerziós immerziós lencsékkel vizsgálja, immerziós olajat kell használni. A legjobb, ha speciális, nem fluoreszkáló immerziós olajat használ. Helyette a fenti glicerin is használható, illetve folyékony paraffin is használható, de a törésmutatója alacsony, ami enyhén befolyásolja a képminőséget. Befolyás.
A fluoreszcens mikroszkóp elve és szerkezeti jellemzői
A fluoreszcens mikroszkóp egy nagy fényhatékonyságú pontot használ bizonyos hullámhosszúságú fény kibocsátására (például ultraibolya fény 3650 hüvelyk vagy lila kék fény 4200 hüvelyk) a szűrőrendszeren keresztül gerjesztő fényként, hogy gerjeszti a mintában lévő fluoreszcens anyagokat, hogy fluoreszcenciát bocsássanak ki. különböző színek Ezt követően figyelje meg az objektívlencse és a szemlencse nagyításával. Ily módon erős kontrasztos háttér alatt, még akkor is, ha a fluoreszcencia nagyon gyenge, könnyen azonosítható és nagy érzékenységgel rendelkezik. Főleg a sejtszerkezet és -funkció, valamint a kémiai összetétel kutatására használják. A fluoreszcens mikroszkóp alapszerkezete egy közönséges optikai mikroszkópból és néhány kiegészítőből áll (például fluoreszcens fényforrás, gerjesztő szűrő, kétszínű nyalábosztó és blokkoló szűrő stb.). Fluoreszkáló fényforrás – általában ultranagy nyomású higanylámpát (50-200W) használnak, amely különböző hullámhosszúságú fényt bocsát ki, de mindegyik fluoreszcens anyagnak van egy gerjesztési hullámhossza, amely a legerősebb fluoreszcenciát produkálja, ezért egy gerjesztőszűrőt (Általában Léteznek ultraibolya, lila, kék és zöld gerjesztő szűrők), amelyek csak egy bizonyos hullámhosszú gerjesztő fényt engednek át és sugározzák be a mintát, miközben más fényt nyelnek el. Az egyes anyagok gerjesztőfénnyel történő besugárzása után nagyon rövid időn belül látható fluoreszcenciát bocsátanak ki a besugárzási hullámhossznál hosszabb hullámhosszal. A fluoreszcencia specifikus és általában gyengébb, mint a gerjesztő fény. A specifikus fluoreszcencia megfigyelése érdekében blokkolást (vagy elnyomást) kell hozzáadni az objektívlencse mögé, és azzal együtt kell használni.
A különbség a fluoreszcens mikroszkóp és a közönséges mikroszkóp között
1. A megvilágítási módszer általában episzkopikus, azaz a fényforrást az objektívlencsén keresztül vetítik a mintára;
2. A fényforrás ultraibolya fény, a hullámhossz rövidebb, és a felbontás nagyobb, mint a hagyományos mikroszkópoké;
3. Két speciális szűrő található, a fényforrás előtti a látható fény kiszűrésére szolgál, a szemlencse és az objektívlencse közötti pedig az ultraibolya sugarak kiszűrésére szolgál az emberi szem védelmére.
A fluoreszcens mikroszkóp egyfajta optikai mikroszkóp is, a fő különbség az, hogy a kettő gerjesztési hullámhossza eltérő. Ez határozza meg a fluoreszcens mikroszkóp és a hagyományos optikai mikroszkóp közötti különbséget a szerkezet és a felhasználás tekintetében.
A fluoreszcens mikroszkópia alapvető eszköz az immunfluoreszcens citokémiában. Olyan fő alkatrészekből áll, mint a fényforrás, a szűrőlemez rendszer és az optikai rendszer. Ez egy bizonyos hullámhosszú fény használata a minta gerjesztésére fluoreszcencia kibocsátására, és a minta fluoreszcens képének megfigyelése az objektívlencse és az okulárrendszer erősítésével.
