A fluoreszcens mikroszkópia alapelvei és szerkezeti jellemzői
A fluoreszcencia mikroszkópia a pont magas lumineszcencia-hatékonyságának felhasználása, a színrendszer szűrése révén bizonyos hullámhosszú fény kibocsátása (például ultraibolya 3650 a fénybe vagy ibolya-kék 4200), mint gerjesztő fény, a gerjesztés. A mintában lévő fluoreszkáló anyag különböző színű fluoreszcenciát bocsát ki, majd az objektíven és a szemlencséken keresztül felnagyítja a megfigyeléshez. Ily módon az erős kontrasztos háttérben, ha a fluoreszcencia nagyon gyenge is, könnyen azonosítható, nagy érzékenység, elsősorban a sejtszerkezet és -funkció, valamint a kémiai összetétel vizsgálatára használják. A fluoreszcens mikroszkóp alapszerkezete egy közönséges optikai mikroszkópból és néhány kiegészítőből áll (például fluoreszcens fényforrás, gerjesztő szűrők, kétszínű nyalábleválasztó és blokkoló szűrők stb.). Fluoreszcens fényforrás – általában használt ultranagynyomású higanylámpa (50-200W), amely többféle hullámhosszú fényt bocsát ki, de mindegyik fluoreszcens anyagnak a legerősebb a fluoreszcens gerjesztési hullámhossza, ezért gerjesztőszűrőket kell hozzáadni (általában ultraibolya, ibolya, kék és zöld gerjesztő szűrő), így csak egy bizonyos hullámhosszú gerjesztő fényt a minták besugárzása, míg a többi fény elnyelődik. Szükséges tehát egy gerjesztő szűrő (általában ultraibolya, ibolya, kék és zöld gerjesztő szűrők) hozzáadása, hogy csak bizonyos hullámhosszú gerjesztőfény menjen át a próbatesten, míg a többi fény elnyelődik. Ha minden anyagot gerjesztőfénnyel sugározunk be, akkor nagyon rövid időn belül hosszabb hullámhosszú látható fluoreszcenciát bocsát ki, mint a besugárzott fény. A fluoreszcencia specifitása általában gyengébb, mint a gerjesztő fény, a specifikus fluoreszcencia megfigyelése érdekében ki kell választani a blokkolás (vagy elnyomás) szükségessége mögött álló objektívlencsét.
Fluoreszcencia mikroszkóp és közönséges mikroszkóp különbség
1. A megvilágítási módszer általában esik, vagyis a fényforrást az objektívlencsén keresztül vetítik a mintára;
2. A fényforrás ultraibolya fény, rövidebb hullámhosszú és nagyobb felbontású, mint a hagyományos mikroszkópok;
3. Két speciális szűrő található, a fényforrás előtti a látható fény kiszűrésére szolgál, a szemlencse és az objektívlencse közötti pedig az ultraibolya fényt az emberi szem védelmére.
A fluoreszcens mikroszkóp egyfajta optikai mikroszkóp is, a fő különbség az, hogy a kettő gerjesztési hullámhossza eltérő. Ez határozza meg a fluoreszcens mikroszkóp és a közönséges optikai mikroszkóp szerkezetét és a különböző módszerek alkalmazását.
A fluoreszcens mikroszkóp az immunfluoreszcens citokémia alapvető eszköze. Fényforrásból, szűrőlemez-rendszerből és optikai rendszerből, valamint egyéb fontosabb alkatrészekből áll. Egy bizonyos hullámhosszú fény segítségével stimulálja a mintát fluoreszcencia kibocsátására, amelyet az objektívlencsén és az okulárrendszeren keresztül felnagyít, hogy megfigyelje a minta fluoreszcens képét.
