A fluoreszcencia mikroszkópok két típusra oszthatók az optikai út alapelve szerint:
1.
A régebbi fluoreszcencia mikroszkópok reflektorfényt használnak a fluoreszcencia gerjesztésére azáltal, hogy átadják a gerjesztő fényforrást a minta anyagán keresztül. Előnye az erős fluoreszcencia alacsony nagyítás mellett, de hátránya, hogy fluoreszcenciája a nagyítás növekedésével csökken. Tehát csak a nagyobb minták megfigyelésére alkalmas.
2. Esés fényfluoreszcencia mikroszkóp
A gerjesztő fény leesik az objektív lencséről a minta felületére, ugyanolyan objektív lencsével, mint a megvilágító kondenzátor és a fluoreszcencia gyűjtésének objektív lencséje.
Kettős színű gerenda -elosztót (dikroikus tükör) kell hozzáadni az optikai úthoz, amely 45 fokos szöget képez az optikai tengelygel. A gerjesztő fény tükröződik az objektív lencsébe, és a mintára összpontosít. A minta által generált fluoreszcencia, valamint az objektív lencse felületéről és a takaró üvegének tükröződött gerjesztő fénye egyszerre lép be az objektív lencsére, és visszatér a kettős színű gerenda -elosztóhoz, hogy elválasztja a gerjesztési fényt és a fluoreszcenciát. A maradék gerjesztési lámpát ezután a szűrő abszorpciója blokkolja. Ha a gerjesztő szűrők, a kettős színű sugár leválasztók és a blokkoló szűrők különböző kombinációit használják, akkor ezek kielégíthetik a különböző fluoreszcens reakciótermékek igényeit.
Ennek a fluoreszcencia mikroszkópnak az előnyei az egyenletes mező megvilágítás, a tiszta képalkotás és az erősebb fluoreszcencia nagyobb nagyítással.
3. fáziskontrasztmikroszkóp
A fáziskontrasztmikroszkóp egy mikroszkóp, amely képes átalakítani a fáziskülönbséget (vagy az optikai útkülönbséget), amikor a fény egy objektumon keresztül amplitúdóba (fényintenzitás) változik. Elsősorban az élő sejtek, a nem festett szövetszakaszok vagy a festett minták megfigyelésére használják, amelyekben nincs kontraszt.
Az emberi szem csak a látható fény hullámhosszának (szín) és amplitúdójának változásait képes megkülönböztetni, de nem képes megkülönböztetni a fázis változásait. A legtöbb biológiai minta nagyon átlátható, és a fényhullámok amplitúdója alapvetően változatlan marad, miután átjutott, csak a fázisváltozások.
A fáziskontrasztmikroszkóp alapvetően a látható fény optikai útjának különbségét konvertálja a mintán áthaladó amplitúdó különbséggé, ezáltal javítva a különféle struktúrák közötti kontrasztot, és világossá és láthatóvá teszi őket. A mintán való áthaladás után a fény refrakción megy keresztül, eltér az eredeti optikai úttól, és 1/4 λ -vel (hullámhossz) késik. Ha az optikai útkülönbséget újabb 1/4 λ -vel növelik vagy csökkentik, az optikai útkülönbség 1/2 λ lesz, és a két fénysugár közötti interferencia növekszik vagy csökken a tengely kombinálása után, javítva a kontrasztot.
