A fluoreszcens mikroszkóp használatának módszerei és óvintézkedései
Felhasználási mód:
(1) Helyezze az anyaglapot a hordozóasztalra.
(2) Kapcsolja be a fluoreszcens mikroszkóp feszültségszabályozóját. Ezután nyomja meg a startcsoportot a begyújtáshoz. Az UV lámpát 15 percig nem szabad kikapcsolni, és a kikapcsolása után 3 percig nem szabad újraindítani.
(3) Forgassa a gerjesztő szűrőt v állásba, a dikroikus filmet v állásba, válassza ki a 495 vagy 475 nm-es blokkoló szűrőt.
(4) Válassza az uvFL40, uvFL100 fluoreszcenciát fogadó objektívmikroszkópiát.
(5) Adjon nem fluoreszkáló olajat a tárgylemezre, először 40x, majd 100x fókuszáló mikroszkóppal. Fluoreszcencia megjelenítése.
(7) Mivel a fluoreszcens anyag ultraibolya besugárzással a fluoreszcencia növekedésével az idő múlásával fokozatosan gyengült, ezért a mikroszkópos vizsgálat során gyakran kell változtatni a látómezőt.
(8) uvFL10 vagy uvFL20 alacsony nagyítású mikroszkópos anyagot is használhat (alacsony nagyítással, nem fluoreszkáló olaj hozzáadása nélkül).
Fluoreszcens képrögzítési módszer:
Fluoreszcencia mikroszkóppal látható fluoreszcencia kép, az egyik morfológiai jellemzőkkel, a második a fluoreszcencia színével és fényességével, az eredmények elbírálásánál a kettőt átfogó megítéléssel kell kombinálni. Az eredményeket szubjektív mutatók, azaz a dolgozó vizuális megfigyelése alapján rögzítik. Általános minőségi megfigyelésként alapvetően megbízható. A technológia és a tudomány fejlődésével, különböző mértékben, objektív mutatók alkalmazása az ítélet eredményeinek rögzítésére, mint például a sejtspektrofotométer, képelemző és egyéb műszerek használata. Az ezen eszközök által rögzített eredményeket azonban szubjektív megítéléssel is kombinálni kell.
A fluoreszcens mikroszkópos fényképezési technológia nagyon szükséges a fluoreszcens képek rögzítéséhez, mivel a fluoreszcencia könnyen elhalványul és gyengül, így azonnal rögzíthető a fotózás eredménye. A módszer alapvetően megegyezik a hagyományos mikrográfiával. Csak nagy sebességű fotófilmet kell használnia, például ASA200 felett vagy 24. felett. Mivel az ultraibolya fény a fluoreszcencia burst hatása, mint például a FITC markerek, az ultraibolya fény besugárzás 30s, fluoreszcencia fényerő 50%-kal csökken. Ezért az expozíciós sebesség túl lassú a fluoreszcens kép rögzítéséhez. Az általános kutatási fluoreszcens mikroszkópok félautomata vagy teljesen automata mikrofényképezési rendszerrel rendelkeznek.
Óvintézkedések:
(1) Szigorúan a fluoreszcens mikroszkóp gyári kézikönyvében foglalt követelményeknek megfelelően működjön, ne változtassa meg önkényesen az eljárást.
(2) Az ellenőrzést a sötétkamrában kell elvégezni. Miután belépett a sötétkamrába, csatlakoztassa a tápegységet, gyújtsa meg az ultranagynyomású higanylámpát 5-15percig, várja meg, amíg a fényforrás erős fényt bocsát ki, hogy stabilizálódjon, és a szemek teljesen alkalmazkodjanak a sötétkamrához, és majd kezdje el megfigyelni a mintát.
(3) Az ultraibolya fény okozta szemkárosodás megelőzése érdekében a fényforrás beállításakor védőszemüveget kell viselni.
(4) ellenőrizze az időt minden alkalommal, hogy 1 ~ 2 óra megfelelő, több mint 90 perc, ultra-nagynyomású higanylámpa fényerőssége fokozatosan csökkent, a fluoreszcencia gyengült; ultraibolya fénnyel besugárzott minták 3 ~ 5 perc, a fluoreszcencia is jelentősen gyengül; ezért a * nem lehet több 2 ~ 3 óránál.
(5) A fluoreszcens mikroszkóp fényforrás élettartama korlátozott, a mintát központilag kell ellenőrizni, időmegtakarítás és a fényforrás védelme érdekében. Ha meleg, ventilátoros hűtést kell hozzáadni, új izzót kell rögzíteni az idő használatának kezdetétől. Ha a lámpa kialszik, és újra használni akarja, az izzót eléggé le kell hűteni a begyújtás előtt. A fényforrást többször el kell kerülni.
(6) Közvetlenül a festés után figyelje meg a mintát, mivel a fluoreszcencia idővel fokozatosan csökkenni fog. Ha a mintát 4 fokos hőmérsékleten tárolt polietilén műanyag zacskóba helyezzük, az késleltetheti a fluoreszcencia gyengülési idejét és megakadályozhatja a tömítőanyag elpárolgását.
(7) A fluoreszcencia fényerejének megítélési kritériumai: általában négy szintre osztva, azaz „egy” – nincs fluoreszcencia vagy látható gyenge fluoreszcencia. „+” – csak jól látható fluoreszcencia. '+ +' – világos jellel látható
