Fluoreszcens mikroszkóppal kapcsolatos ismeretek
A konfokális fluoreszcens mikroszkópia alapelve: pontszerű fényforrással sugározzák be a mintát, és a fókuszsíkon egy jól körülhatárolható kis fényfolt alakul ki. osztókból áll. A sugárosztó a fluoreszcenciát közvetlenül a detektorba küldi. A fényforrás és a detektor előtt van egy tűlyuk, amelyet megvilágítási tűlyuknak, illetve érzékelő tűlyuknak neveznek. A kettő geometriai mérete megegyezik, körülbelül 100-200nm; a fókuszsíkon lévő fényfolthoz viszonyítva a kettő konjugált, vagyis a fényfolt egy sor lencsén halad át, és végül egyszerre fókuszálható a megvilágító tűlyukra és az érzékelési tűlyukra. Ily módon a fókuszsíkból érkező fény az érzékelési lyukon belül konvergálható, míg a fókuszsík felett vagy alatt szórt fény az érzékelési lyukon kívül blokkolva van, és nem leképezhető. A lézer pontról pontra pásztázza a mintát, és a fénysokszorozó cső a tűlyuk észlelése után pontról pontra megkapja a megfelelő fénypont konfokális képét is, amelyet digitális jellé alakítva továbbít a számítógépnek, végül tiszta képpé aggregálódik. a teljes fókuszsík konfokális képe a képernyőn .
Minden egyes fókuszsík kép valójában a próbatest optikai keresztmetszete, és ennek az optikai keresztmetszetnek mindig van egy bizonyos vastagsága, más néven optikai vékony metszet. Mivel a fókuszpontban a fény intenzitása sokkal nagyobb, mint a nem fókuszpontban, és a nem fókuszsík fényét a tűlyuk szűri, a konfokális rendszer mélységélessége megközelítőleg nulla, és a Z mentén pásztázva. -tengelyen megvalósítható optikai tomográfiás, kialakítva. Figyeljük meg a kétdimenziós optikai metszetet a minta fókuszált pontján. Az XY sík (fókuszsík) szkennelést Z-tengelyes (optikai tengelyes) szkenneléssel kombinálva a minta háromdimenziós képe folyamatos rétegek kétdimenziós képeinek összegyűjtésével és speciális számítógépes szoftverrel feldolgozható.
Azaz a detektáló tűlyuk és a fényforrás tűlyuk mindig ugyanarra a pontra fókuszálnak, így a fókuszsíkon kívül gerjesztett fluoreszcencia nem juthat be a detektáló tűlyukba.
A lézeres konfokális működési elvének egyszerű kifejezése az, hogy fényforrásként lézerfényt használ. A hagyományos fluoreszcens mikroszkópos képalkotás alapján lézeres leolvasó berendezéssel és konjugált fókuszáló berendezéssel egészül ki, valamint számítógépes vezérléssel digitális képfelvételt és -feldolgozást biztosító rendszer.
