A fluoreszcens mikroszkóp elve alkalmazása és felhasználása
(1) A fluoreszcens mikroszkóp elve és szerkezeti jellemzői: a fluoreszcens mikroszkóp nagy fényhatékonyságú pontszerű fényforrást használ, hogy bizonyos hullámhosszúságú fényt bocsát ki (például 3650 hüvelykes ultraibolya fényt vagy 4200 hüvelykes lila kék fényt) a szűrőrendszeren keresztül. mint a gerjesztő fény a minta gerjesztésére. Miután a benne lévő fluoreszcens anyag különböző színű fluoreszcenciát bocsát ki, az objektívlencse és a szemlencse nagyításán keresztül figyelhető meg. Ily módon erős kontrasztos háttér alatt, még akkor is, ha a fluoreszcencia nagyon gyenge, könnyen azonosítható és nagy érzékenységgel rendelkezik. Főleg a sejtszerkezet és -funkció, valamint a kémiai összetétel kutatására használják. A fluoreszcens mikroszkóp alapszerkezete egy közönséges optikai mikroszkópból és néhány kiegészítőből áll (például fluoreszcens fényforrás, gerjesztő szűrő, kétszínű nyalábosztó és blokkoló szűrő stb.). Fluoreszkáló fényforrás – általában ultranagy nyomású higanylámpát (50-200W) használnak, amely különböző hullámhosszú fényt bocsát ki, de mindegyik fluoreszcens anyagnak van egy gerjesztési hullámhossza, amely a legerősebb fluoreszcenciát produkálja, ezért gerjesztőszűrőt (Általában Léteznek ultraibolya, lila, kék és zöld gerjesztő szűrők), amelyek csak egy bizonyos hullámhosszú gerjesztő fényt engednek át és sugározzák be a mintát, miközben más fényt nyelnek el. Az egyes anyagok gerjesztőfénnyel történő besugárzása után nagyon rövid időn belül látható fluoreszcenciát bocsátanak ki a besugárzási hullámhossznál hosszabb hullámhosszal. A fluoreszcencia specifikus és általában gyengébb, mint a gerjesztő fény. A specifikus fluoreszcencia megfigyeléséhez blokkoló (vagy elnyomó) szűrőre van szükség az objektívlencse mögött. Két funkciója van: az egyik, hogy elnyeli és blokkolja a gerjesztő fényt a szemlencsébe, hogy ne zavarja a fluoreszcenciát és ne károsítsa a szemet; a másik az, hogy kiválasztjuk és átengedjük a specifikus fluoreszcenciát, egy meghatározott fluoreszcens színt mutatva. A két szűrőt együtt kell használni.
Kétféle fluoreszcens mikroszkóp létezik az optikai útjukat tekintve:
1. Transzmissziós fluoreszcenciás mikroszkóp: A gerjesztő fényforrást a minta anyagán egy kondenzátorlencsén keresztül vezetik át a fluoreszcencia gerjesztésére. Általában sötét mezős kollektort használnak, és egy közönséges kollektor is használható a tükör beállítására úgy, hogy a gerjesztő fényt átirányítsa és megkerülje a mintára. Ez egy régebbi fluoreszcens mikroszkóp. Előnye, hogy kis nagyításnál erős a fluoreszcencia, hátránya viszont, hogy a fluoreszcencia a nagyítás növelésével csökken. Ezért jobb a nagyobb mintaanyagok megfigyelése.
2. Az epifluoreszcens mikroszkóp a modern időkben kifejlesztett új típusú fluoreszcens mikroszkóp. A különbség az, hogy a gerjesztő fény az objektív lencséjéről a próbatest felületére esik, vagyis ugyanazt az objektívet használják megvilágítási kondenzátorként és a fluoreszcencia gyűjtésére szolgáló objektívként. A fényútba dikroikus sugárosztót kell hozzáadni, amely 45 fokos távolságra van a könnyű urántól. A gerjesztő fény visszaverődik az objektívlencsén, és összegyűjti a mintán. A minta által generált fluoreszcencia és az objektív lencse felületéről és a fedőüveg felületéről visszaverődő gerjesztő fény egyszerre jut be az objektívbe, és visszatér a kétszínű nyalábosztóba, hogy a gerjesztő fény legyen. Elkülönül a fluoreszcenciától , a maradék gerjesztő fényt a blokkoló szűrők elnyelik. Például a különböző gerjesztő szűrők / kétszínű nyalábosztók / blokkoló szűrők kombinációjára váltva kielégítheti a különböző fluoreszcens reakciótermékek igényeit. Ennek a fajta fluoreszcens mikroszkópnak az az előnye, hogy a látómező megvilágítása egyenletes, a képalkotás tiszta, és minél nagyobb a nagyítás, annál erősebb a fluoreszcencia.
(2) A fluoreszcens mikroszkóp használata.
1. Kapcsolja be a fényforrást, és az ultranagy nyomású higanylámpának néhány percig fel kell melegednie, hogy elérje a legfényesebb pontot.
2. A transzmissziós fluoreszcens mikroszkópnak el kell helyeznie a szükséges gerjesztőszűrőt a fényforrás és a kondenzátor közé, és a megfelelő blokkoló szűrőt az objektívlencse mögé. Az epifluoreszcens mikroszkópoknak be kell helyezniük a szükséges gerjesztőszűrőt/kétszínű nyalábosztót/blokkoló szűrőbetéteket a fényútban lévő résekbe.
3. Nézze meg kis nagyítású lencsével, és állítsa be a fényforrás közepét úgy, hogy az a teljes megvilágítási pont közepén helyezkedjen el a különböző fluoreszcens mikroszkóp modellek beállító eszközének megfelelően.
4. Helyezze el a mintadarabot, és fókuszálás után figyelje meg. Használat közben figyelni kell: ne figyelje közvetlenül a végszűrővel, nehogy szemkárosodást okozzon; a minták olajlencsével történő megfigyelésekor speciális, fluoreszcencia nélküli olajlencsét kell használni; a nagynyomású higanylámpa kikapcsolása után nem lehet azonnal újra bekapcsolni, tesztelni kell. 5 perc után újraindítható, különben instabil lesz és befolyásolja a higanylámpa élettartamát.
(3) Figyelje meg az 0,01 százalékos akridinnarancssárga fluoreszcens festékkel megfestett sejteket fluoreszcens mikroszkóp alatt, kék-lila fényszűrővel ellátott oktatási platformon. A sejtmagot és a citoplazmát gerjesztik, hogy a fluoreszcenciát két különböző színű (sötétzöld és narancsvörös) hozzon létre.
