A többfoton lézerszkenner mikroszkóp előnyeinek fokozása
A lézeres pásztázó többfoton mikroszkópia jelentős előrelépés az optikai mikroszkóppal szemben. Meg tudja figyelni az élő sejtek mélyszerkezetét, a rögzített sejtek és szövetek szerkezetét, valamint tiszta és éles többrétegű Z-síkú struktúrákat, azaz optikai metszeteket tud készíteni, amelyekből megszerkesztheti A próbatest háromdimenziós szilárd szerkezetét. A konfokális mikroszkópiánál lézeres fényforrást használnak, amely kitágítás után kitölti az objektívlencse teljes hátsó fókuszsíkját, majd áthalad a tárgylencse lencserendszerén, hogy a minta fókuszsíkján egy nagyon kis pontba konvergáljon. Az objektívlencse numerikus rekeszértékétől függően a legfényesebb megvilágítási pont átmérője körülbelül 0,25 ~ 0,8 μm, a mélysége pedig körülbelül 0,5 ~ 1,5 μm . A konfokális folt mérete a mikroszkóp kialakításától, a lézer hullámhosszától, az objektívlencse jellemzőitől, a szkennelési egység állapotának beállításaitól és a minta tulajdonságaitól függ. A terepi mikroszkóp megvilágítási tartománya és megvilágítási mélysége nagy, míg a konfokális mikroszkóp megvilágítása a fókuszsíkra koncentrálódik. A konfokális mikroszkópia legalapvetőbb előnye, hogy vastag fluoreszcens mintákon (amely elérheti az 50 μm-t vagy azt is) finom optikai metszeteket tud végezni, a szeletek vastagsága pedig körülbelül 0,5-1,5 μm. Soros optikai metszetképek készíthetők a minta fel-le mozgatásával egy kifinomult mikroszkóp Z-tengelyű léptetőmotor segítségével. A képinformációk gyűjtése egy pontos síkban történik, anélkül, hogy a minta más helyeiről kibocsátott jelek zavarnák. A háttérfluoreszcencia hatásának megszüntetése és a jel-zaj arány növelése után a konfokális képek kontrasztja és felbontása jelentősen javul a hagyományos térben megvilágított fluoreszcencia képekhez képest. Sok példányban sok bonyolult szerkezeti komponens fonódik össze, és összetett rendszereket alkot, de miután elegendő optikai metszetet sikerült összegyűjteni, szoftver segítségével három dimenzióban rekonstruálhatjuk. Ezt a kísérleti módszert széles körben alkalmazzák a biológiai kutatásokban a sejtek vagy szövetek közötti összetett szerkezeti és funkcionális kapcsolatok tisztázására.
