A transzmissziós fluoreszcens mikroszkópia és a reflexiós fluoreszcens mikroszkópia közötti különbségek és előnyök és hátrányok
1. Transzmissziós fluoreszcenciás mikroszkóp: A gerjesztő fényforrást a minta anyagán egy kondenzátoron keresztül továbbítják a fluoreszcencia gerjesztésére. Az általánosan használt sötét mező koncentrátorok vagy közönséges koncentrátorok használhatók a reflektor beállítására, hogy a gerjesztő fényt és az oldalsó fényt a mintára alakítsák. Ez egy viszonylag régimódi fluoreszcens mikroszkóp. Előnye az erős fluoreszcencia kis nagyításnál, hátránya viszont, hogy a fluoreszcenciája gyengül a nagyítás növelésével. Ezért jobb nagyobb mintaanyagok megfigyelésére.
2. Esősugaras fluoreszcens mikroszkóp: Ez egy új típusú fluoreszcens mikroszkóp, amely a modern időkben fejlődött ki. Az előzőtől eltérően a gerjesztő fény az objektívről a próbatest felületére esik le, ugyanazt az objektívlencsét használva, mint a megvilágító kondenzátor és a fluoreszcencia gyűjtésére szolgáló objektív. Az optikai úthoz egy kétszínű sugárnyaláb elválasztót kell hozzáadni, amely 45 fokos szöget zár be a fotouránnal. A gerjesztő fény visszaverődik az objektívlencsén, és összegyűlik a mintán. A minta által generált fluoreszcencia és az objektívlencse és a fedőüveg felületéről visszaverődő gerjesztő fény egyszerre jut be az objektívlencsékbe és tér vissza a kettős színsugaras elválasztóba, elválasztva a gerjesztő fényt és a fluoreszcenciát. A maradék gerjesztő fényt ezután elnyeli a blokkoló szűrő. A gerjesztő szűrők, a kettős színsugaras elválasztók és a blokkoló szűrők különböző kombinációinak alkalmazása esetén ezek kielégíthetik a különböző fluoreszcens reakciótermékek igényeit. Ennek a fluoreszcens mikroszkópnak az előnyei az egyenletes látómező megvilágítás, a tiszta képalkotás és az erősebb fluoreszcencia nagyobb nagyítás mellett.
A transzmissziós fluoreszcens mikroszkópia előnyei és hátrányai
Fényforrás: nagynyomású higanylámpa vagy halogénlámpa.
Spotlámpa tükör: Sötét mező spotlámpa használata a gerjesztés és a fluoreszcencia elkülönítésére.
Objektív lencse: Bármilyen típusú objektív használható.
Példány: A vékony minták alkalmasabbak transzmissziós megfigyelésre.
Előnyök: ① A sötét mezős kondenzátor használatának köszönhetően a gerjesztő fény nem tud bejutni az objektívbe, így könnyű sötét háttér kialakítását és jó kontraszt elérését, valamint bármilyen objektív használható megfigyelésre. ② Ha kis nagyítású objektívet használ, az fényesebb, mint a visszaverő fluoreszcens mikroszkóp.
Hátránya: A reflektor középpontját és magasságát helyesen kell beállítani, különben nem készíthető fényes fluoreszkáló kép. A sötét mezős spotlámpa fókusztávolság-korlátozása miatt vastag üveglemezek nem használhatók. A látómező megvilágítási területe ne legyen túl nagy, különben a fluoreszcens minta fluoreszcens színe elhalványulhat. A vastag vagy átlátszatlan minták nem alkalmasak.
A reflektív fluoreszcens mikroszkóp előnyei és hátrányai
Fényforrás: nagynyomású higanylámpa vagy halogénlámpa.
Fókuszáló lencse: Mivel az objektív fókuszáló lencseként szolgál, nincs szükség fókuszlencsére.
Objektívlencse: A használt objektívnek képesnek kell lennie elegendő ultraibolya fény áteresztésére, és önmagában nem kell fluoreszcenciát létrehoznia, a numerikus rekesznyílás korlátozása nélkül.
Példány: vastag és átlátszatlan példányok egyaránt megfigyelhetők.
Előnyök: ① Mivel az objektív egyben reflektorként is szolgál, nem igényel nagy beállítást. ② A Kolar megvilágítási módszerrel kihasználható a rekesznyílás és a látómező rekeszének hatása. Az objektív lencséjének numerikus rekesznyílása nincs korlátozva, és nagy felbontás mellett is nagy felbontású képek készíthetők Vastag vagy átlátszatlan minták is megfigyelhető, és vastag fedőlemezek is használhatók Más megfigyelési módszerek is kombinálhatók a visszavert fluoreszcenciával, különösen a fáziskülönbség módszerrel és az átviteli differenciális interferencia módszerrel Ezzel elkerülhető a szükségtelen fluoreszcencia színfakulási jelenség.
Hátránya: Földi nagyítású objektív használatakor a kép viszonylag sötét, ezért nagy numerikus rekeszértékű objektívet kell használni. A szűrőrendszernek hatékonyan el kell választania a gerjesztési lumineszcenciát és a fluoreszcenciát.
