Mikrobapopuláció meghatározása - direkt mikroszkópos számlálási módszer!
I. Célkövetelmények
1, A hematokrit lemezszámlálás elvének tisztázása.
2, Sajátítsa el a mikrobiális számlálás módszerét hematokrit lemez segítségével.
II. Alapelvek
A mikroszkópos közvetlen számlálási módszer a vizsgálandó minta kis mennyiségű szuszpenziója, amelyet meghatározott területű és térfogatú speciális tárgylemezen (más néven bakteriológiai számlálóként) kell vizsgálni, a mikroszkópban közvetlenül számolva egy egyszerű, gyors, intuitív módszerrel. Jelenleg a hazai és külföldi általánosan használt bakteriológiai számlálók a következők: vérsejtszámláló lemez, Peteroff-Hauser bakteriológiai számlálók és Hawksley bakteriológiai számlálók stb., amelyek élesztőgombák, baktériumok, penészgombák és egyéb szuszpenziók számlálására használhatók, az alapelv. ugyanaz. Az utóbbi két típusú számláló össztérfogata 0.02 mm3 a fedőlemez felhelyezése után, a fedőlemez és a hordozószelet közötti távolság pedig mindössze 0,02 mm, így a kisebb cellák, mint pl. a baktériumokat olajimmerziós objektívvel lehet megfigyelni és megszámolni. Ezeknek a számlálóknak a használata mellett létezik egy becslési módszer is, amely a közvetlenül mikroszkóp alatt megfigyelt kenetfelület és a látómező terület arányát határozza meg, amelyet általában a tehéntej bakteriológiai vizsgálatára használnak. A közvetlen mikroszkópos számlálási módszer előnyei intuitívak, gyorsak és könnyen kezelhetők. Ennek a módszernek azonban az a hátránya, hogy az eredmény általában az elhalt és élő szervezetek összege. Van néhány módszer ennek a hátránynak a kiküszöbölésére, mint például az élő baktériumokkal festett mikrokamrás tenyészet (rövid ideig történő) kombinációja és a citokinézis inhibitorok hozzáadása a csak élő szervezetek megszámlálásának céljára.
A művelet lépései
1, Bakteriális szuszpenzió készítése
Használjon steril sóoldatot a sörélesztő megfelelő koncentrációjú baktériumszuszpenziójának elkészítéséhez.
2, Tükör számláló kamra
A minták hozzáadása előtt először meg kell vizsgálni a számlálólemez számlálókamráját. Ha szennyeződés van rajta, a számlálás előtt meg kell tisztítani és szárazra kell fújni.
3, Minták hozzáadása
Tisztítsa meg és szárítsa meg fedőlemezzel letakart vérsejtszámláló lemezt, majd steril kapilláris bürettával rázza fel a sörélesztő szuszpenziót a fedőlemez széléről, hogy egy kis cseppet csepegjen, hogy a rés mentén a baktériumfolyadék kapilláris behatolással a számláló kamra automatikusan, általában a számláló kamra megtölthető bakteriális folyadékkal. Mintavételkor a baktériumoldatot először alaposan fel kell rázni; minták hozzáadásakor a számlálókamrában ne legyenek légbuborékok.
4,Mikroszkópos számlálás
A minta hozzáadása után hagyja pihenni 5 percig, majd helyezze a vérsejtszámláló lemezt a mikroszkóp hordozó tárgyasztalra, először keresse meg a számláló kamra helyét kis nagyítással, majd állítsa át nagy nagyításra a számláláshoz. A mikroszkóp fényének intenzitását megfelelően állítsa be, a reflektoros mikroszkópnál arra is figyelni kell, hogy a fény ne legyen oldalra tolódva, különben a látómezőt nem könnyű nyelvesen letisztítani a számlálókamra rácsvonalát, ill. csak a függőleges vonalat látja, vagy csak a vízszintes vonalat. Ha a bakteriális folyadék túl sűrűnek vagy túl hígnak bizonyul a számlálás előtt, a hígítást a számlálás előtt újra be kell állítani. Az általános mintahígítási követelmények minden sejtben körülbelül 5-10 baktériumot tartalmaznak. Minden egyes számlálókamrához 5 középső rekeszben (4 sarokban és egy középső rekeszben) lévő organizmusokat választják ki a számláláshoz. A rácsvonalakon elhelyezkedő organizmusokat általában csak a felső és a jobb oldali vonalakon számolják. Élesztő bimbózás esetén, amikor a bimbózó test eléri az anyasejt méretének felét, két organizmusnak számít. Egy minta megszámlálása a két számlálókamrából az átlagértékben a minta baktériumtartalmának kiszámításához.
5. A hematokrit lemez tisztítása
Használat után öblítse le vízzel a vérsejtszámláló lemezt a csap alatt, ne használjon kemény tárgyakat a mosáshoz és keféléshez, ne szárítsa meg egyedül, és ne szárítsa meg hajszárítóval a mosás után. Mikroszkóposan vizsgálja meg a lemezt, hogy nincs-e maradék organizmus vagy más csapadék az egyes rekeszekben. Ha nem tiszta, a mosást addig kell ismételni, amíg tiszta nem lesz.
