Hibakeresési módszerek és lépések fáziskontraszt mikroszkópiához
a. A Kuhler világítási rendszer beállítása alapján használja a világos mező módszert a minta tiszta fókuszálásához;
b. Fordítsa a reflektort Ph1 állásba, és igazítsa a forgótányéron lévő skálavonalhoz. Válasszon ki egy 10-szeres fáziskontraszt objektívet, és cserélje ki a megfigyelendő átlátszó mintára;
c. Távolítsa el az egyik szemlencsét, cserélje ki egy központosító teleszkóppal, és fókuszáljon a látómezőben lévő két kontrasztgyűrűre (az objektívlencse fekete kontrasztgyűrűjére és a kondenzátorlencse áteresztőképességi kontrasztgyűrűjére);
d. A látómezőben lévő két különbségi gyűrű nem feltétlenül esik egybe. Állítsa be a reflektor két állítóeszközét (a különbségi gyűrűk bal és jobb helyzetének beállítása állítórudakkal és súrlódó gombokkal az első és hátsó helyzet beállításához), hogy az átlátszó gyűrű előre-hátra mozogjon, hogy egybeessen a fekete gyűrűvel ;
e. A beállítás után kapcsoljon vissza a megfigyelő okulárra, és nyomja be a zöld szűrőt az optikai útba, hogy megfigyelje a minta fáziskülönbség-képét;
f. 20x és 40x objektívvel történő megfigyeléskor a reflektort Ph2 pozícióba, 100x objektív használata esetén pedig Ph3 pozícióba kell állítani.
Alkalmazási terület: Alkalmas átlátszó, festetlen vagy festetlen minták megfigyelésére, mint például különböző sejtek, élő szövetek, festetlen vagy festetlen szövetszeletek, vízi élőlények stb.
A fáziskontraszt mikroszkóp alapelve
Amikor a fény áthalad egy viszonylag átlátszó mintán, nincs jelentős változás a fény hullámhosszában (színében) és amplitúdójában (fényességében). Ezért, ha festetlen mintákat (például élő sejteket) normál optikai mikroszkóp alatt figyelünk meg, gyakran nehéz megkülönböztetni morfológiájukat és belső szerkezetüket. A cella különböző részeinek törésmutatójában és vastagságában mutatkozó különbségek miatt azonban különbségek lesznek a közvetlen és a szórt fény optikai útjában, amikor áthalad ezen a mintán. Ahogy az optikai út növekszik vagy csökken, a gyorsuló vagy késleltetett fényhullámok fázisa megváltozik (ami fáziskülönbséget eredményez). A fény fáziskülönbsége szabad szemmel nem érzékelhető, de a fáziskülönbség-mikroszkóp speciális eszközével - egy kör alakú apertúrával és egy fázislemezzel - képes a fény interferencia jelensége segítségével a fény fáziskülönbségét amplitúdó-különbséggé alakítani. (világos és sötét különbség), amelyet az emberi szem képes észlelni. Ezáltal az eredetileg átlátszó objektum nyilvánvaló fény- és sötét különbségeket mutat, fokozza a kontrasztot, és lehetővé teszi, hogy tisztán megfigyeljük az élő sejteket és bizonyos finom struktúrákat a sejtek belsejében, amelyek nem láthatók vagy jól láthatók a közönséges optikai mikroszkóppal és sötétterű mikroszkóppal.
A fáziskontraszt mikroszkóp képalkotási elve: Az optikai forrás csak egy kör alakú apertúra átlátszó gyűrűjén tud áthaladni, amely aztán fénysugárba fókuszálódik. Amikor ez a fénysugár áthalad a vizsgált tárgyon, az egyes részek eltérő optikai útja miatt különböző mértékű eltérésen (diffrakción) megy keresztül. Annak a ténynek köszönhetően, hogy az átlátszó gyűrű által alkotott kép egybeesik a fázislemezen lévő konjugált felülettel és az objektívlencse mögötti fókuszsíkkal. Ezért a közvetlen fény, amely nem tért el, áthalad a konjugált felületen, míg az elhajlott fény a kompenzáló felületen. A fázislemezen lévő konjugált felület és kompenzációs felület eltérő tulajdonságai miatt ezek a két részen áthaladó fény bizonyos fáziskülönbségét és intenzitáscsökkenését generálják. A két fénykészlet ezután konvergál a hátsó lencsén keresztül, és ugyanazon az optikai úton halad, interferenciát okozva a közvetlen és a szórt fény között, és a fáziskülönbséget amplitúdókülönbséggé változtatja. Ily módon a fáziskontraszt mikroszkópos vizsgálat során az emberi szem által nem megkülönböztethető fáziskülönbség amplitúdókülönbséggé (fényességkülönbséggé) alakul, amelyet az emberi szem egy színtelen átlátszó test fényén keresztül megkülönböztethet.
