Biomikroszkópia a szövetblokkok térfogatának figyelembevételével
Biológiai mikroszkópia Eddig a hidegrögzítés, a fagyasztott ultravékony metszet és a fagyasztva szárítás rutin módszer a szövet- és sejtröntgen-mikroszkópos metszeteknél. Ennek a módszernek a részletei a következők:
A kondenzátorral ellátott biológiai mikroszkópoknál a kondenzátor fel-le mozgatható, hogy a fényerő mérsékelt legyen, és a változtatható fény apertúrája is módosítható a mérsékelt 9b fényerő eléréséhez. Napos fény esetén a kondenzátor megfelelően felemelhető, és a változtatható fényforrás rekesznyílása megfelelően megnövelhető. Ha a fény túl erős, a kondenzátorlencse megfelelően leengedhető, és a metsző fény rekesznyílása megfelelően csökkenthető. Ha ebben az esetben mégis vakítónak érzi magát, kiválaszthat egy megfelelő szűrőt, és ráhelyezheti a kondenzátor alatti konzolra. Ez a tölgy képes lesz elérni az Önt kielégítő fényerőt. Természetesen a kondenzátor felső és alsó helyzetének beállítása, a változtatható optikai leolvasás rekeszméretének beállítása és a megfelelő szűrő kiválasztása bizonyos gyakorlási időt igényel a tapasztalatszerzéshez.
A biológiai mikroszkópiában nagyon fontos kérdés, hogy a mintavétel és a sejtek szétválasztása során fagyasztva szárítás és gyanta beágyazás (FD), ultravékony aggregátumok fagyasztása után, valamint fagyasztva szárítás után 65 elem tartalma minden részben. gondosan kell kezelni. Az elemezni kívánt sejtek nem sérülhetnek meg. Mert a röntgen mikroanalízis nemcsak sok lépésből áll, hanem sokba is kerül. Ha a vizsgált sejtek hosszú idő és többlépcsős feldolgozás után sérült vagy elhalt sejtek, akkor nagyon sajnálatos téves következtetéseket levonni. Például a kollagenáz kezeléssel elválasztott kardiomiocitáknak két alakja van, az egyik hosszú rúd alakú, a másik kerek. Ez utóbbiak haldokló sejtek, amelyek a sejtizoláció során károsodnak.
Biomikroszkópia Az elektrolitok mennyisége és eloszlása ebben a két sejttípusban meglehetősen eltérő. A körkörös szívizomsejtekben nagyon magas a Na és nagyon alacsony a K, a fonálférgekben pedig nagyon magas a ca koncentrációja. Más elemzési módszerekkel végzett ellenőrzések után bebizonyosodott, hogy a kerek sejtek magas Na- és alacsony K-értéke, valamint a mitokondriumokban a magas Ca a sejtszeparációs folyamat során a sejtmembrán károsodásának köszönhető. A sejtek és szövetek jéghideg rögzítési módszere általában az, hogy először kioltást és rögzítést alkalmaznak, majd folyékony nitrogénben tárolják. Az oltó rögzítés nagyon fontos a tartósító hatás szempontjából. Az élő sejtek vagy a friss szövetek vízben gazdagok. Kioltáskor a sejtek vagy szövetek a zúzott hűtőközeggel közvetlenül érintkező részei (különösen folyékony nitrogénnel történő kioltáskor) gyakran először lefagynak és rögzítődnek, így "héjat" képeznek, ami akadályozza A sejtek központi részei zúzott és hidegen rögzített. Ezért az X-line mikroterület elemzésekor gyakran kiderül, hogy jégkristályok vannak a nagyobb sejtek közepén. Ennek elkerülése érdekében törött hűtőközegként olyan anyagot használnak, amelynek olvadáspontja magasabb, mint a folyékony nitrogén, de alacsonyabb, mint a 806c. Sok ilyen anyag van, de a legolcsóbb a tömény propán (forráspont - 42,120c, olvadáspont - 187.10c, molekulatömeg 44,1), a hűtési sebesség a leggyorsabb. De hátránya, hogy gyúlékony.
A biológiai mikroszkóp az izomrostokat egy speciális állványra tudja helyezni, így amikor az izomrostok összehúzódása elér egy bizonyos fázist és rögzíteni kell, azonnal indítsa el a fúvókát, hogy folyékony propánt permetezzen az izomrostokra, hogy kioltsa és rögzítse azt. Ezután az izomrostokat a kerettel együtt kiszedtük és folyékony nitrogénbe helyeztük. Ha vérsejteket vagy izolált sejteket rögzít, először alacsony sebességű centrifugálással koncentrálja a sejteket, helyezze át a sejteket egy jó hővezető képességű ezüst fiolába, helyezze az injekciós üveget folyékony propánba, és rögzítse lefagyasztva. A Hall laboratóriumban a patkány hasnyálmirigyének rögzítésekor a két acéltömböt folyékony héliummal (vagy folyékony nitrogénnel) előhűtöttük, majd a két réztömböt csipesszel összefogtuk, és a hasnyálmirigy elülső és hátulsó oldalára helyeztük a kioltás és rögzítés céljából. a hasnyálmirigy. A szövetek vagy sejtek folyékony nitrogénben tárolhatók a kioltás és rögzítés után hosszú távú tárolás céljából.
Biológiai mikroszkópia A legelismertebb fagyasztott ultravékony metszet módszere mellett itt van egy másik, a tudósok által használt leválasztási technika is. Egy anyagot adnak hozzá, hogy üledéket képezzenek az elemzendő komponenssel, hogy rögzítsék az elemzés előtt, majd az üledéket elemzik. Például az emberek gyakran használnak oxalátot és piroantimonátot a ca izomsejtekbe történő lerakására. Az előbbi nem elég érzékeny a citoplazma alacsony Ca-koncentrációjára; a piroantimonát érzékenyebb és elektronsűrű lerakódásokat tud kialakítani szabad Ca-val az agyban, de a piroantimonát nem kompatibilis a nátriummal, mangánnal, báriummal, vassal Lerakódások is keletkeznek és kevésbé specifikusak. A minta előkészítési folyamata hasonló a hagyományos transzmissziós elektronmikroszkópos ultravékony metszetű minták elkészítéséhez, a különbség annyi, hogy 3 százalékos kálium-piroantimonátot (foszfát puffer sóoldat, pH 7,6) fixáltunk 6 órával a rögzítés előtt, és a megfestett izom ultravékony metszeteken, Fekete lerakódások láthatók az egyes szarkomerek A és 2 sávjának középvonalában, és festetlen metszeteket használtunk a röntgen-mikroanalízishez. Diaminobenzidin-tetrahidrokloridot (DAB) használtak hem tartalmú anyagok kicsapására és így tovább. A hisztokémiai precipitációs reakció és a röntgen mikrodifferenciálódási híd kombinációja szóba jöhet olyan laboratóriumokban, ahol nincs fagyasztott ultravékony metszet. A félkvantitatív a vizsgálandó elemek csúcsmagassága szerint végezhető
